ГОСТ Р 53244— 2008
6 Приборы и оборудование
См. приложения A— D и
ГО
С
Т
Р
53214
.
7
Руководство, касающееся процедуры
7.1 Общие положения
Общие требования, имеющие отношение к ПЦР-амплификации для обнаружения ГМО. описаны в
ИСО 21569 [11.
В приложениях A— D описаны методы ПЦР-детектирования наряду сдеталями их возможностей и
применения. Для каждого метода подробно описаны демонстрируемые рабочие характеристики.
Концентрация анализируемой последовательности ДНК должна находиться внутри динамическо
го диапазона метода.
П р и м е ч а н и е — Для определения достаточно ли качество кодирующей нити ДНК (по длине и структур
ной целостности), а такжедостаточны ли ее чистота и количество для обеспечения обнаружения и количественного
определения ГМО. принадлежащего кцелевому таксону, может быть проведен контроль, специфический для целе
вого таксона. Он может быть тем более обоснован, когда ДНК экстрагирована из композитного или подвергнувшего
ся глубокой обработке материала.
ДНК. экстрагированная из каждой
а
н
а
ли
з
и
р
у
е
мо
й
п
роб
ы
, должна быть проанализирована не ме
нее чем в двух повторностях.
Должны быть использованы соответствующие контроли [см.
ГО
С
Т
Р
53214 (таб
лиц
а 1)]
.
7.2 Стабильность целевой последовательности
Для сортов различного географического и филогенетического происхождения
с
л
е
д
у
е
т
учи
т
ы
вать
стабильность целевой последовательности как аллельную, так и по числу копий.
7.3 Калибровка анализа
Следует применятьсоответствующее число калибровочных точек и повторностей, охватывающих
диапазон количественного определения [например, четыре калибровочных точки в двух повторностях
(всего
ч
е
т
ы
р
е
х
два
значения) или шесть калибровочных точек с одним измерением в каждой точке
(всего
ш
е
сть
значений)]. Качество калибровки влияет на погрешность измерения
[11]
.
В качестве альтернативы геномной ДНК в качестве эталонного материала для калибровки
до
пу
с
к
а
е
тс
я
использовать, например, серию разбавлений плазмиды или синтетической двухцепочечной
ДНК. содержащих целевую последовательность, при условии, что она демонстрирует при калибровке
поведение, аналогичное эталонному материалу геномной ДНК и геномной ДНК. экстрагированной из
а
н
а
ли
з
и
р
у
е
мо
й
п
роб
ы
.
7.4 Особенности количественного определения
Методы ПЦР должны быть соответствующим образом разработаны с целью минимизации вариа
бельности.
П р и м е ч а н и е — В зависимости от применяемого метода н/или анализируемого материала присутствие
конструкций, включающих несколько целевых генов, может привести к преувеличению фактического содержания
ГМО.
Предел количественного определения (LOQ) — в
соотв
е
тств
ии
с ГО
С
Т
Р
53214
.
На расчетсодержания ГМО. основанный на числе копий целевых последовательностей в гаплоид
ном геноме, влияет гомо- и гетерозиготность изучаемых
п
роб
(см. приложения A— D).
Применение метода МС, (порогового цикла) обосновано только в том случае, если эффективнос
ти амплификации пробы, специфической для целевого таксона, и пробы, специфической для ГМО,
очень близки.
7.5 Требования к обеспечению качества
Для установления достоверности изменений необходимознание относительного стандартного от
клонения воспроизводимости метода в соответствии с
ГО
С
Т
Р
5725
-
1
и
ГО
С
Т
Р
5725
-
6
.
Если наличие
происходящей из ГМО ДНК (в процентах) запротоколировано, необходимы:
а) согласованность результатов для каждой лабораторной пробы, достигающаяся:
- через отбраковку измерений меньших, чем предел количественного определения, и
з