ГОСТ Р 53244— 2008
Т а б л и ц а С
.
31 —
Олигонуклеотиды
Н
а
ии
в
н
ова
ни
е
о
ли
гом
ухл
вот
и
да
ДНК-последооательность олигонуклеотида
Окончательная
концентрация при
ПЦР
Целевая последовательность таксон-слецифического гена
SSIlb
1-5’
5-СТС ССА АТС СТТ TgA CAT СТд С-3’
500 нмоль/дм1
SSIlb
1-3-
5-ТСд ATT ТСТ СТС ТТд дТд АСА дд-3’
500 нмолы’дмл
SSIlb
-Taq
5-FAM-AgC AAA дТС АдА дСд СТд САА ТдС A-TAMRA-3’
2 0 0 H M o n b i’flM J
Целевая последовательность ГМО
Т25 1-5’
5-дСС АдТ ТАд дСС АдТ ТАС ССА-31
500 нмоль/дмл
Т25 1-3-
5-ТдА дСд AAA ССС TAT ААд ААС ССТ-31
500 нмоль/дм11
T25-2-Taq
5-FAM-TgC Адд CAT дСС СдС TgA ААТ C-TAMRA-3**
200
H M o n b /flM J
* FAM: 6-карбоксифлуоресцеин; TAMRA: 6-карбокситетраметилродамин.
Длина ПЦР-лродукта SSIlb составляет 151 п. о.; длина ПЦР-продукта Т25 составляет 149 п. о.
С.9.6 Прибор
С.9.6.1 Общие положения
Должен использоваться стандартный лабораторный прибор, если не определено иначе.
С.9.6.2 Термоциклер
Отмеченный температурно-временной профиль исходно был оттестирован в ходе совместного испытания
лабораторий с прибором СДП ABI PRISM*17700 (Applied Blosystems). Допускается использовать другие системы
ПЦР в реальном времени после адаптации условий реакции.
С.9.6.3 Реакционные плашка и микропробирки
Реакционные плашка и микропробирки должны быть подходящими для ПЦР-амллификации е термоциклере,
например. ABI PRISM* 96-Well Optical Reaction Plate или MicroAmp* Optical Caps (восемь крышек/полоска. плоская)
(Applied Biosystems)соответственно. Допускается использовать и другие реакционные плашки, микрофлаконы или
микропробирки, если они могут продемонстрировать такие же или лучшие результаты.
С.9.7 Процедура: порядок проведения ПЦР
С.9.7.1 Общие положения
ПЦР для целевой последовательности таксон-слецифического гена
zSSIlb
и для специфической целевой по
следовательности линии Т25 должна проводиться в отдельных пробирках. Мультиплексная ПЦР (с использовани ем
различных флуоресцентных меток для зондов) не была протестирована или валидирована.
Метод приведен для суммарного объема реакционной смеси ПЦР 25 мкл с реактивами, список которых при
веден в таблицах С.32 для
zSSIlb
и С.33 для Т25.
Т а б л и ц а С.32 — Реакционная смесь амплификации в окончательном объеме на одну реакционную пробир
ку для целевой таксон-специфической последовательности
zSSIlb
Суммарный объем реакции25 мкл
Кодирующая нить ДНК (50 нг геномной ДНК кукурузы)2.5 мкл
Реакционный буфер (включая
ДНК полимеразу и дНТФ)
TaqMan® Universal PCR Master Mix (ABI)
12,5 мкл
Праймеры
zSSII
M
-
S
’
мzSSIlb
1-3’ (см. таблицу C.37)
См. таблицу C
.
31
Зонд
zSS//6-Taq (см. таблицу C.31)
См. таблицу C
.
31