ГОСТ Р 53244— 2008
для ДНК испытательного образца, получается путем интерполяции из стандартных кривых. Для определения коли
чества (в процентах) GTS 40-3-2 в испытательном образце число копий конструкции GTS 40-3-2 делится на число
копий гена!е1 и значений С,,специфическую для конструкции GTS 40-3-2. умноженную на 100. как описано в разде ле
С.4.9.
С.4.5 Реактивы
С.4.5.1 Общие положения
Для получения информации о качестве реактивов, которые могут использоваться, см. ГОСТ Р
53214(
п
одраз
-
д
е
п
6.6).
С.4.5.2 Вода.
С.4.5.3 TaqMan© Universal Master Mix. 2*.
C.4.5.4 Стандартный материал (плазмида).
Стандартным материалом, использовавшимся для разработки и валидации метода, служила плазмида
pMulSL2 (28). которая включена в набор плазмид для обнаружения ГМ сои (RRS, Fasmac Ns PS-2 и Nippon Gene Ns
310-04981).
C.4.5.5 Олигонуклеотиды
Последовательности праймеров и зондов, специфических для конструкции и таксон-специфических генов
сои линии GTS 40-3-2, приведены в таблице С.
13
.
Т а б л и ц а С
.
13—
Олигонуклеотиды
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
о
ли
го
ну
к
л
е
от
и
да
ДНК-последовательность олигонуклеотида
Окончательная
концентрация лри
ПЦР
Целевая последовательность таксон-специфического гена
Le1n02-5-
5’-gCC СТС ТАС ТСС ACC ССС А-3’
500 нмоль/дм5
Le1n02-3’
5’-дСС CAT СТд САА дСС ТТТ ТТ-3’
500 нмоль^дм*
Le1-Taq
S-FAM-AgC ТТС дСС дСТ ТСС ТТС AAC ТТС AC-TAMRA-3’
200 нмоль,‘дм!
Целевая последовательность ГМО
RRS 01-5’
5-ССТ ТТА ддА ТТТ САд CAT САд Тдд-3*
500 нмоль/дм!
RRS01-3’
5-дАС ТТд ТСд ССд ддА АТд-3’
500 нмоль/дм5
RRS-Taq
5-FAM- СдС ААС СдС ССд САА АТС C-TAMRA-3"
200 нмоль/дм^
* FAM: 6-карбоксифлуоресцеин: TAMRA: 6-карбокситетраметилродамин.
Длина пектинового ПЦР-продукта составляет 118 п. о.; длина ПЦР-лродукта GTS 40-3-2 составляет 121 п. о.
С.4.6 Прибор
С.4.6.1 Общие положения
Следует использовать стандартный лабораторный прибор, если не определено иначе.
С.4.6.2 Термоциклер
Отмеченный температурно-временной профиль исходно был оттестирован в ходе совместного испытания
лабораторий с прибором СДП ABI PRISM*17700 (Applied Biosystems). Допускается использовать другие системы
ПЦР в реальном времени после адаптации условий реакции.
С.4.6.3 Реакционные плашка и микропробирки
Реакционные плашка и микропробирки должны быть подходящими для ЛЦР-амплификации в термоциклере,
например. ABI PRISM* 96-Well Optical Reaction Plate ипи MicroAmp* Optical Caps (восемь крышек/полоска. плоская)
(Applied Biosystems), соответственно.
Д
о
пу
с
к
а
е
тс
я
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
др
у
г
их
ср
е
дств
и
зм
е
р
е
ний
с м
е
тро
л
ог
ич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
,
в та
к
ж
е
обор
у
дова
ния
и реак/nueoe
с т
е
хнич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
н
е
ни
ж
е
в
ыш
е
у
к
аза
нных
,
е
с
ли
мож
е
т б
ы
ть
п
о
к
аза
н
о
.
ч
то
их
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
п
р
и
вод
и
т
к
т
е
м ж
е
р
е
з
ул
ьтатам
.
С.4.7 Процедура: порядок проведения ПЦР
С.4.7.1 Общие положения
ПЦР для целевой последовательности таксон-специфического гена te l и для специфической целевой по
следовательности линии GTS 40-3-2 следует проводить в отдельных пробирках. Мультиплексная ПЦР (с использо
ванием различных флуоресцентных меток для зондов) не была протестирована или валидирована.
Метод приведен для суммарного объема реакционной смеси ПЦР 25 мкл с реактивами, приведенными в таб
лицах С.
14
для Le1 и С. 15 для GTS 40-3-2.
31