ГОСТ Р 53244— 2008
Приложение D
(рекомендуемое)
Метод, специфический для трансформационного события
Раздел D.1. Не включен (см. предисловие).
0.2 Метод относительного количественного определения содержания ДНК кукурузы линии MON 810
(специфический для трансформационного события) с использованием ПЦР в реальном времени
0.2.1 Введение
В этом приложении приведен метод специфической амплификации и количественного определения специ
фического участка, состоящего из таксон-опецифического гена (гена белка группы высокой мобильности (ftmg) (42))
кукурузы (Zea mays) и единственной копии ДНК из района граничного соединения геномной последовательности и
элемента встроенной последовательности, происходящего из вируса мозаики цветной капусты (ЗЗв-лромотора
CaMV). получившегося в результате рекомбинации
i
n
v
itro
,
который присутствуете генетически модифицированной
устойчивой к насекомым кукурузе MON 810 («YieldGuard». Monsanto), с целью оценки относительного количества
ДНК кукурузы МON 810.
Ограничения см. a D.2.8.
D.2.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров
0.2.2.1 Общие положения
Метод был оптимизирован для сертифицированного стандартного материала (ССМ IRMM-413) (43). состоя
щего из высушенной кукурузной муки, содержавшей смеси генетически модифицированной кукурузы MON 810 и
обычной кукурузы.
Воспроизводимость и точность описанного метода была проверена в ходе совместных испытаний лаборато
рий с использованием серии ССМ IRMM-413, упомянутых выше.
Число копий целевых генов в расчете на геном определено не было.
Метод был исходно разработан для СДП ABI PRISM*17700.
0.2.2.2 Совместные испытания лабораторий
Метод был валидирован в ходе совместного испытания лабораторий Федеральным институтом оценки рис
ков (Federal Institute (or Risk Assessment. B(R) в содружестве с Американской ассоциацией химиков зерна (American
Association of Cereal Chemists, AACC), Совместным исследовательским центром (Joint Research Centre. JRC)
Евро комиссии (ЕС), Институтом стандартных материалов и измерений (Institute (or Reference Material and
Measurement, IRMM), Институтом здоровья и защиты потребителей (Institute for Health and Consumer Protection.
IHCP) и фирмой GeneScan. Berlin. Совместное испытание было организовано таким образом, чтобы оно
удовлетворяло критериям, изложенным в согласованном протоколе IUPAC (J5). Исследование было предпринято
15 лабораториями, исполь зующими ABI PRISM* 7700. ABI PRISM* 7900 (Applied Biosystems) или iCycler tO систему
детектирования ПЦР в ре альном времени (Bio-Rad LaPoratones). 14 лабораторий сообщили результаты.
В соответствии с инструкциями производителя для экстракции ДНК была использована ДНК-экстракционная
система GENESp/л (GeneScan).
Для каждого неизвестного образца была предпринята одна экстракция ДНК. Каждый испытательный образец
был проанализирован с помощью ПЦР в трех повторностях.
Каждый участник получил 12 неизвестных образцов. Образцы состояли из шести сертифицированных стан
дартных материалов (ССМ IRMM-413). содержавших от <0,02 % до 5,0% ГМ-кукурузы MON 810 (по массе) в смеси с
обычной кукурузой.
Межлабораторные испытания были спланированы как двойные «слепые» испытания. Каждая лаборатория
получила каждую из концентраций ССМ ГМ-кукурузы MON 810 в двух неизвестных образцах.
Подробности совместного испытания лабораторий приведены в таблице D.f.
Т а б л и ц а D.f — Данные валидации количественного определения специфического для трансформационного
события MON 810 за 2003/2004 годы
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
п
о
к
азат
е
ля
О бразец t
<
0,02 %
О бр азец 2
0.10 i
0.03%
О бр азец 3
0.50 %
±
0.04
%
О бразец 4
1.00
L
0,05 %
О бразец 5
2,0
±
0.1
%
О бр азец 6
5%
Число лабораторий, приславших
результаты
11
14
14
14
14
14
Число исключенных лабораторий’
1
1
0
2
0
0
52