ГОСТ Р 53244— 2008
С-5.5.2 Вода.
С.5.5.3 TaqMan© Universal Master Mix. 2*.
C.5.5.4 Стандартный материал (плазхчида).
Стандартным материалом, использовавшимся для разработки и валидации метода служила плазмида рМи15
(28). которая включена в набор плазмид для обнаружения ГМ кукурузы (Fasmac № РМ-2 и Nippon Gene
№
319-04981). Могут быть использованы идругие стандартные материалы, если они могут продемонстрироватьта кие
же или лучшие результаты.
С.5.5.5 Олигонуклеотиды
Последовательности праймеров и зондов, специфических для конструкции линии MON 810 и таксон-специ-
фических генов кукурузы, приведены в таблице С.19.
Т а б л и ц а С. 19 — Олигонуклеотиды
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
о
ли
го
ну
к
л
е
от
и
да
ДНК последовательность олигонуклеотида
Окончательная
концентрация при
ПЦР
Целевая последовательность таксон-специфического гена
SSIlb
1-5’
5-СТС ССА АТС СТТ TgA CAT CTg С-3’
5 0 0 H M O n b /flM J
SSIlb
1-3’
5’-TCg ATT ТСТ СТС TTg gTg АСА gg-3’
500 нмолы’дм1
SSIlb
-Taq
5-FAM-AgC AAA gTC AgA gCg CTg CAA TgC A-TAMRA-3’*
200 нмоль/дм1
Целевая последовательность ГМО
MON810 2-5‘
5 - gAT gCC TTC ТСС СТА gTg TTg A-3’
500
H M o n b /flM J
MON810 2-3’
5- ggA TgC ACT CgT TgA TgT TTg-3’
500 нмоль/дмл
MON810-Taq
5-FAM- AgA TAC CAA gCg gCC ATg gAC AAC AA-TAMRA-3’
200 нмолы’дм1
* FAM: 6-карбоксифлуоресцеин: TAMRA: 6-карбокситетраметилродамин.
Длина ПЦР-лродукта SSIlb составляет 151 л. о.; длина ПЦР-продукта MON 810 составляет 113 п. о.
С.5.6 Прибор
С.5.6.1 Общие положения
Следует использовать стандартный лабораторный прибор, если не определено иначе.
С.5.6.2 Термоциклер
Отмеченный температурно-временной профиль исходно был оттестирован в ходе совместного испытания
лабораторий с прибором СДП ABI PRISM* 7700 (Applied Biosystems). Допускается использовать другие системы
ПЦР а реальном времени после адаптации условий реакции.
С.5.6.3 Реакционные плашка и микропробирки
Реакционные плашка и микропробирки должны быть подходящими для ПЦР-амплификации а термоциклере,
например. ABI PRISM* 96-Well Optical Reaction Plate или MicroAmp* Optical Caps (восемь крышек/полоска. плоская)
(Applied Blosystems). соответственно. Допускается использование других реакционных плашек, микрофлаконов
или микропробирок, если они могут продемонстрировать такие же или лучшие результаты.
Д
о
пу
с
к
а
е
тс
я
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
др
у
г
их
ср
е
дств
и
зм
е
р
е
ний
с м
е
тро
п
ог
ич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
,
а
также
об
ор
у
дова
ния
и
р
е
а
к
т
и
вов с
техническими
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
н
е
ни
ж
е
в
ыш
е
у
к
аза
нных
,
е
с
пи
мож
е
т б
ы
ть
п
о
к
аза
н
о
.
ч
то
их
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
п
р
и
вод
и
т
к
т
е
м ж
е
р
е
з
уп
ьтвтвм
.
С.5.7 Процедура: порядок проведения ПЦР
С.5.7.1 Общие положения
ПЦР для целевой последовательности таксон-специфического гена
zSSIIb
и для специфической целевой по
следовательности линии MON 810 следует проводить в отдельных пробирках. Мультиплексная ПЦР (с использова
нием различных флуоресцентных меток для зондов) не была протестирована или валидирована.
Метод приведен для суммарного объема реакционной смеси ПЦР 25 мкл с реактивами, приведенными в таб
лицах С
.
20
для
zSSIIb
и С.21 для MON 810.
37