ГОСТ Р 53244— 2008
см. в [23]. В соответствии с этими данными оцененный относительный LOQ составляет 0.06 (= SOкопий;82000 ко
пий <100 %).
Концентрации, исследованные в совместном испытании лабораторий, приведены в таблице С.1.
П р и м е ч а н и е — Число копий в совместном испытании лабораторий не определялось.
С.1.3 Адаптация
Специфическая информация отсутствует.
С.1.4 Принцип
Фрагмент последовательности трансгена, использованного для конструирования сои линии QTS 40-3-2. раз
мером 83 п. о., амплифицированный с помощью ПЦР двух праймеров, специфических для гена СТР из
Pe
t
un
ia
hy
brida
(RRS-F. см. таблицу С.2) и к 35в-промотора (RRS-R. см. таблицу С.2). ПЦР-продукты измерялись в ходе
каждого цикла ПЦР (в реальном времени) с помощью олигонуклеотидного зонда, специфического для соединения
гена СТР и 353-промотора (см. таблицу С.2. RRS-TMP). Этот олигонуклеотидный зонд помечен двумя флуоресцен
тными красителями — FAM в качестве репортерного красителя и TAMRA в качестве гасителя. Для этих цепей при
менялся
н
абор
TaqMan* химия.
Фрагмент последовательности гена лектина сои размером 81 п. о. был амплифицирован с помощью ПЦР в
отдельной реакции ПЦР в реальном времени с использованием двух праймеров, специфических кгенусоевого лек
тина. и продукты ПЦР измерялись в течение каждого цикла ПЦР с применением зондов, специфических кгену сое
вого лектина производства TaqMan* (см. таблицу С.2. Лектин-ТМР).
Количественное определение проводили с использованием метода длС, или t метода двойной калибровоч
ной кривой (см. С.1.8).
С.1.5 Реактивы
С.1.5.1 Общие положения
Для получения информации о качестве используемых реактивов см.
ГО
С
Т
Р
532U (
п
одразд
е
л
6
.
6)
.
С.1.5.2 Вода.
С.1.5.3 Буфер для ПЦР (без МдС1г). 10’.
С.1.5.4 Раствор МдС1г. c(MgCt^) = 2S ммоль/дм3.
С.1.5.5 Раствор дНТФ. с(дНТФ) = 2.5 ммоль/дм^1(каждый).
С.1.5.6 Олигонуклеотиды
Харат
е
р
и
ст
и
к
и
применяемых олигонуклеотидов приведены в таблице С.2.
Т а б л и ц а С.2 — Олигонуклеотиды
ДМК-последоаатсльмость олигонуклеотида
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
олигонуклеотида
Окончательная
концентрация при ПЦР
Целевая последовательность референсного гена
Лектин-F
5-ТСС ACC ССС АТС САС ATT Т-3’
900 нмоль/дм3
Лектин-R
5-ggC АТА дАА ддТ дАА дТТ дАА ддА-3’
900 нмоль/дм3
Лектин-ТМР
5-FAM-AAC Сдд ТАд СдТ ТдС САд СТТ Cg-TAMRA-3’*
100 нмоль/дм3
Целевая последовательность ГМО
RRS-F
5-дСС ATg ТТд ТТА ATT ТдТ дСС АТ-3’
900 нмоль/дм3
RRS-R
5-дАА дТТ CAT ТТС ATT Тдд АдА ддА С-31
900 нмоль/дм3
RRS-TMP
5-FAM-CTT дАА АдА ТСТ дСТ АдА дТС АдС ТТд ТСА gCg-TAMRA-3-
100 нмоль/дм’3
* FAM: 6-карбоксифлуоресцеин: ТА MR А: 6-карбокситетраметилродамин.
Длина пектинового ПЦР-продукта составляет 81 п. о.; длина ПЦР-продукта RRS составляет 83 п. о.
С.1.5.7 Термостабильная ДНК-полимераза
ДНК-лолимераза AmpHTaq Gold1®.
С.1.5.8 Урацил-Ы-гликозилаза (необязательно).
С.1.6 Прибор
С.1.6.1 Общие положения
Следует использовать стандартный лабораторный прибор, если не определено иначе.
19