ГОСТ Р 53244— 2008
О
к
о
нч
а
ни
е
таб
лицы
А
.
1
Образец
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
п
о
к
азат
е
ля
U1U2изU4U5ив
Число поддержанных лабораторий
9
9
9
9
9
9
Число образцов на лабораторию
4
4
4
4
4
4
Число выбросов по Кохрану
1
1
1
1
—
—
Число выбросов по Груббсу
—
1
1
1
1
1
Число принятых образцов
35
34
34
34
35
35
Ожидаемое число копий
7339
18349
36697
55046
91743
146788
Среднее число копий
9985
23885
46918
75161
100541
122080
Отклонение от истинного
з
н
а
ч
е
ния
.
%
38.1
30.2
27,9
36.5
9.6
-16.8
Стандартное отклонение повторяемос
ти S,"
1318.59
1463.60
5796.58
4539.57
11306.89
14843.41
Относительное стандартное отклоне
ние повторяемости. % ь13.216.1312.356.0411.2512,16
Стандартное отклонение воспроизво
димости S*"2013.122083.576145.396806.8514592.0417777.70
Относительное стандартное отклоне
ние воспроизводимости. %
"
20.168.7213.109.0614,5114.56
* Выражается как число копий.
ь Выражается как процент от среднего
з
н
а
ч
е
ния
.
А.1.2.3 Молекулярная специфичность
А.1.2.3.1 Общие положения
Метод был разработан для использования в качестве целевой части последовательности, описанной в
EMBU’GenBank/DDBJ. регистрационный номер Х04050. Эта последовательность является уникальной для
Z
e
a
m
a
y
s
(кукурузаУмаис) и
Z
e
a
m
a
y
s
s
u
b
s
p
.
diplop
e
r
e
nn
l
s
(теосинте мексиканского) [14J.
А.1.2.3.2 Теоретическая специфичность
Теоретическая специфичность праймеров и зондов была оценена путем поиска в базах данных
EMBL.’GenBankiDDBJ с использованием нуклеотидных последовательностей в качестве запросных последователь
ностей с помощью программы BLASTN на сайте
Н
а
ци
о
н
а
л
ь
н
ого
ин
ст
и
т
у
та
здравоохранения
С
Ш
А
[9 октября
2003 г.). Результат поиска подтвержден полной идентичностью только с ожидаемыми целевыми последовательнос
тями.
А.1.2.3.3 Экспериментальное определение специфичности
Специфичность метода была проверена в отношении широкого диапазона нецелевых таксонов и 20 различ
ных линий кукурузы, представляющих географическое и филогенетическое разнообразие образцов (14). Не было
обнаружено перекрестной реактивности с нецелевыми таксонами (за исключением теосинте мексиканского
Z
e
a
m
a
y
s
s
u
b
s
p
.
diplop
e
r
e
nm
s,
дикого предка культурной кукурузы) (14).
[20]
.
Были установлены число копий и аллель
ная стабильность целевой последовательности у различных линий кукурузы (14).
А.1.2.4 Оптимизация
Оптимизация была проведена для системы детектирования последовательностей (СДП) ABI PRISM 7700® и
набора TaqMan® химия. Расчет праймеров и зондов был проведен с помощью программного обеспечения Рптег
Express* (Applied Biosystems).
А.1.2.5 Предел детектирования (LOD)
В соответствии с рекомендациями разработчика метода LOD составляет 10 копий целевой последователь
ности (14). Наименьшее число копий целевой последовательности, включенных в совместные испытания лабора
торий. составляло 7399 копий целевой последовательности.
А.1.2.6 Предел количественного определения (LOO)
В соответствии с рекомендациями разработчика метода LOQ составляет 100 копий целевой последователь
ности (14). Наименьшее число копий целевой последовательности, включенных в совместные испытания лабора
торий. составляло 7399 копий целевой последовательности.
7