ГОСТ Р 53244— 2008
В.1.5.8 Урацил-М-гликозилаза (необязательно).
В.1.6 Прибор
8.1.6.1 Общие положения
Следует использовать стандартный лабораторный прибор, если не определено иначе.
В.1.6.2 Термоциклер
Отмеченный температурно-временной профипь изначально был оттестирован с приборами СДП ABI PRISM*3
7700 (Applied Blosystems) и СДП GeneAmp* 5700 (Applied Blosystems).
Д
о
пу
с
к
а
е
тс
я
использовать другие системы
СДП ПЦР в реальном времени после адаптации реакционных условий.
В.1.6.3 Реакционные пробирки
Реакционные пробирки должны быть подходящими дпя ПЦР-амплификации в термоциклере, например, ABI
PRISM6 96-Well Optical Reaction Plate или MIcroAmp* Optical Caps (восемь крышек на полоску, плоская) (Applied
Blosystems).
Д
о
пу
с
к
а
е
тс
я
применение
др
у
г
их
ср
е
дств
и
зм
е
р
е
ний
с м
е
тро
л
ог
ич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
,
а та
к
ж
е
обор
у
дова
ния
и
р
е
а
к
т
и
вов с т
е
хнич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
н
е
ни
ж
е
в
ыш
е
у
к
аза
нных
,
е
с
ли
мож
е
т б
ы
ть
п
о
к
аза
н
о
.
ч
то
их
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
п
р
и
вод
и
т
к
т
е
м ж
е
р
е
з
ул
ьтатам
.
8.1.7 Процедура: порядок проведения ПЦР
В.1.7.1 Общие положения
Порядок проведения ПЦР для целевой последовательности референсмого гена и целевой последователь
ности ГМО следует проводить в отдельных пробирках. Мультиплексная ПЦР (с использованием различных флуо
ресцентных меток для зондов) не была протестирована или валидирована.
Метод изложен для суммарного обьема реакционной смеси ПЦР 50 мкл с реактивами, приведенными в таб
лице В.З.
Т а б л и ц а В.З — Окончательный объем реакционной смеси амплификации (концентрация на одну
реакционную пробирку)
Целевая последовательность референсного гена
Суммарный объем50 мкл
Кодирующая нить ДНК (максимальное количество 200 нг)10 мкл
ДНК-полимераза
AmpIlTaq Gold*
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
дУТФ
Урацил-А/-гликозилаза AmpErase6
400 мкмоль/дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
БуферA TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROX)»
1*
Mgci2
5 ммоль/дм3
Праймеры
Лектин-F и Лектин-R (см. таблицу В.2)
См. таблицу В.2
дНТФ
дАТФ. дЦТФ. дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
Лектин-ТМР (см. таблицу В.2)
См. таблицу В.2
Целевая последовательность ГМО
Суммарный объем
50 мкл
Кодирующая нить ДНК (максимальное количество 200 нг)10 мкл
ДНК-полимераза
AmpIlTaq Gold*
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
дУТФ
Урацил-А/-гликоэилаза AmpErase0
400 мкмолы’дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
Буфер A TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROX)“
1*
МдС12
5 ммоль/дм3
Праймеры
35S-F и 35S-R (см. таблицу В.2)
См. таблицу В.2
дНТФ
дАТФ. дЦТФ. дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
35S-TMP (см. таблицу В.2)
См. таблицу В.2
" ROX— карбокси-Х-родамин.
14