ГОСТ Р 53244— 2008
С.5.2.2 Совместные испытания лабораторий
Всегодвенадцать неизвестных образцов кукурузы, содержавших от 0 % до 10 % (по массе) высушенной куку
рузной муки, полученной из кукурузы линии MON 810. были проанализированы пятнадцатью участниками.
П р и м е ч а н и е — Для определения значений С( и приготовления неизвестных образцов для совместного
испытания лабораторий были использованы семена образца линии MON 810. гетерозиготной по ГМ-вставке. Для
валидации были приготовлены неизвестные образцы смесей кукурузной муки, которые содержали 0 %. 0.1 %, 0.5
%
.
1%. 5 % и 10 % (по массе) сухой кукурузной муки, полученной из этой линии. Гомогенность образцов на каж дом
уровне была протестирована с использованием количественного метода в соответствии с протоколом
АОАС (29], 134].
Валидация метода для кукурузы линии MON 810 была проведена путем совместного испытания лабораторий
в соответствии с протоколом АОАС (34]. Совместное испытание лабораторий было организовано Национальным
Институтом исследования продуктов питания (NFRI. Tsukuba. Япония) совместно с Центром маркировки качества
пищевых продуктов и услуг потребителям. Саитама (Saitama), Япония и Национальным Институтом здравоохране
ния (National Institute of Health Sciences), Токио. Япония. 1S лабораторий, включая участников из Японии. Республи
ки Корея и Соединенных Штатов Америки, проводили это совместное испытание с использованием СДП ABI
PRISM*’ 7700 (Applied Biosystems)e две отдельные стадии. От всех участников требовалось следовать процедурам
экстракции ДНК и количественной ПЦР.
Первая стадия имела своей целью определение С/для MON 810. Все участники получили набор праймеров,
зондов, стандартный материал и ДНК. экстрагированную из семян кукурузы линии MON 810. которые были приго
товлены из Qiagen ONeasy Plant Maxi kit и чья пригодность была протестирована NFRI перед исследованием. Эти
образцы ДНК использовались для измерения числа копий конструкции специфической для MON 810 и таксон-сле-
цифической
zSSIIb
последовательности ДНК кукурузы. Все измерения на этой стадии были повторены три раза. От
участников было получено всего 90 комплектов данных. Корреляции калибровочных кривых, для которых были
представлены данные от всех участников, были приемлемыми (г > 0.990). В соответствии с протоколом АОАС [34].
лаборатории, чьи данные были признаны «выбросами», должны быть удалены как имеющие экстремальные значе
ния (тест Кохрана, р < 0.025) и как имеющие экстремальный средний уровень (тест Груббса.р < 0.025). После обоих
тестов одна лаборатория была выявлена как по Кохрану по соотношению конструкции специфической для MON 810 и
таксон-специфической последовательности
zSSIIb
.
Ни одного выброса не наблюдалось по другим соотношени ям.
как это показано в таблице
С
.
17
.
Т а б л и ц а С.17 — Сводные данные
C
f
для MON 810
Целевая последовательность
Последовательность, специфическая
для конструкции MON 810
Число участвовавших лабораторий
15
Число выбросов по тесту Кохрана
1
Число выбросов по тесту Груббса
0
Число оставшихся лабораторий
14
C
f
0.38 ± 0.01
“
Выражено как среднее значение ± доверительный интервал (а * 0.05).
Величина
C
f
может быть повторно определена исследователями с использованием подходящих стандар
тных материалов кукурузы линии MON 810.
На второй стадии были проведены «слепые» анализы. Неизвестные образцы кукурузной муки были приго
товлены как шесть пар «слепых» дубликатов, которые содержали 0 %.0.1 %. 0.5 %. 1
%
.
5 % и 10
%
(по массе) высу
шенной муки ГМ-кукурузы линии MON 810 в смеси с обычной кукурузной мукой. Образец, содержавший 0 %
кукурузы линии MON 810. был использован как «пустой» образец, чтобы отсеять неработоспособные лаборатории
перед статистическим анализом. Участники были проинструктированы экстрагироватьДНК из образцов с использо
ванием набора Qiagen. Данные, представленные лабораториями, оставшимися в испытаниях после тестов на вы
бросы. были использованы для расчета среднего значения и доверительного интервала (а = 0.05). Средние
значения были определены как С1для расчета количества ГМО (в %) в ходе «слепого» анализа. Среднее значение
С1для количественного определения последовательности, специфической для конструкции MON 810. составляло
0.38.
14 лабораторий, участвовавших во второй стадии, проанализировали 168 образцов путем амплификации
zSSIIb
и последовательности, специфической для конструкции MON 810. Лаборатории, которые не смогли опреде
лить. что «пустые» образцы не содержат кукурузы линии MON 810 (0 %). были расценены как неработоспособные, и
34