ГОСТ Р 53244— 2008
С.8.2.2 Совместные испытания лабораторий
Всего 12 неизвестных образцов кукурузы, содержавших от 0 % до 10 % (по массе) высушенной кукурузной
муки, полученной из кукурузы линии GA21. были проанализированы 15 участниками.
П р и м е ч а н и е — Для определения значений Cf и приготовления неизвестных образцов для совместного
испытания лабораторий были использованы семена образца линии GA21. гетерозиготной по ГМ-вставке. Для вали
дации были приготовлены неизвестные образцы смесей кукурузной муки, которые содержали 0 %. 0.1 %. 0.5 %. 1%.
5 % и 10 % (по массе) сухой кукурузной муки, полученной из этой линии. Гомогенность образцов на каждом уровне
была протестирована с использованием количественного метода в соответствии с протоколом АОАС (29). (34).
Валидация метода для кукурузы линии GA21 была проведена путем совместного испытания пабораторий а
соответствии с протокопом АОАС (34). Совместное испытание лабораторий было организовано Национальным
Институтом исследования продуктов питания (NFRI, Tsukuba. Япония) совместно с Центром маркировки качества
пищевых продуктов и услуг потребителям. Саитама (Saitama), Япония и Национальным Институтом здравоохране
ния (National Institute of Health Sciences). Токио. Япония. 15 лабораторий, включая участников из Японии. Республи ки
Корея и Соединенных Штатов Америки, проводили это совместное испытание с использованием СДП ABI
PRISM4’ 7700 (Applied Biosystems) вдве отдельные стадии. От всех участников требовалось следовать процедурам
экстракции ДНК и количественной ПЦР.
Первая стадия имела своей целью определение Cfдля GA21 Все участники получили набор праймеров, зон
дов. стандартный материал и ДНК. экстрагированную из семян кукурузы линии GA21. которые были приготовлены
из Olagen DNeasy Plant Maxi kit. и чья пригодность была протестирована NFRI перед исследованием. Эти образцы
ДНК использовались для измерения числа копий конструкции специфической для GA21 и таксон-слецифической
zSSIIb
последовательности ДНК кукурузы. Все измерения на этой стадии были повторены три раза. От участников
было получено всего 90 комплектов данных. Корреляции калибровочных кривых, для которых были представлены
данные от всех участников, были приемлемыми (г> 0,990). В соответствии с протоколом АОАС (34) лаборатории,
чьи данные были признаны «выбросами», должны быть удалены как имеющие экстремальные значения (тест Кох
рана, р < 0.025) и как имеющие экстремальный средний уровень (тест Груббса.р < 0.025). Ни одного выброса не на
блюдалось ни в одном из тестов, как это показано в таблице С.23.
Т а б л и ц а С.23 — Сводные данные Cfдля GA21
Целевая последовательность
Последовательность, специфическая для конструкции GA21
Число участвовавших лабораторий
15
Число выбросов по тесту Кохрана
0
Число выбросов по тесту Груббса
0
Число оставшихся лабораторий
15
С
Г
1.40 ± 0.05
“
Выражено как среднее значение ± доверительный интервал (а = 0.05).
Значение Cf может быть повторно определено исследователями с использованием подходящих стандар
тных материалов кукурузы линии GA21.
На второй стадии были проведены «слепые» анализы. Неизвестные образцы кукурузной муки были приго
товлены какшесть пар «слепых» дубликатов, которые содержали 0 %. 0.1 %. 0,5 % . 1 %. 5 % и 10 % (по массе) вы
сушенной муки ГМ-кукурузы линии GA21 в смеси с обычной кукурузной мукой. Образец, не содержавший кукурузы
линии GA21 (0 %). был использован как «пустой» образец, чтобы отсеять неработоспособные лаборатории перед
статистическим анализом. Участники были проинструктированы экстрагировать ДНК из образцов с использовани
ем набора Qiagen. Данные, представленные лабораториями, оставшимися в испытаниях после тестов на выбросы,
были использованы для расчета среднего значения и доверительного интервала (п = 0.05). Средние значения
были определены какС/для расчета количества ГМО (%) в ходе «слепого» анализа. Среднее значение Cfдля коли
чественного определения последовательности, специфической для конструкции GA21. составляло 1.40.
14 лабораторий, участвовавших во второй стадии, проанализировали 168 образцов путем амплификации
zSSIIb
и последовательности, специфической для конструкции GA21. Лаборатории, которые не смогли определить
пустые образцы с содержанием кукурузы линии GA21 0 %. были расценены как неработоспособные, и асе их дан
ные были исключены еще до тестов на выбросы. Во всех экспериментах корреляции калибровочных кривых были
приемлемыми (г> 0.990). Лаборатории, показавшие экстремальные отклонения и экстремальные средние значе
ния данных в парах «слепых» дубликатов с разными уровнями GA21, были исключены из испытания как выбросы по
Кохрану и по Груббсу (35). (36). соответственно, еще перед статистическим анализом достоверности и точности. В
40