ГОСТ Р 53244— 2008
О
к
о
нч
а
ни
е
таб
лицы
D
.
4
Э
та
пы
определенияВремя, сТемпературе, ’С
ПЦР
(4 5 ЦИКЛОВ)
Стадия 1
Денатурация
159 5
Стадия 2
Отжиг и элонгация6060
D.2.8 Ограничения и интерпретация результатов
Приведенный метод пригоден для измерения соотношения уровня MON 810-специфической ДНК к содержа
нию ДНК кукурузы. Это соотношение отражает относительное количество MON 810 в кукурузном ингредиенте ис
следуемого пищевого продукта.
П р и м е ч а н и е — Если кукурузная ДНК удалена или сильно деградирована в ходе приготовления пище
вого продукта (например, рафинированного растительного масла) или если кукуруза является лишь очень минор
ным компонентом в анализируемом образце, количество кукурузных референсных и/или ГМ-специфических копий
будет на уровне или ниже предела количественного определения, и описанные методы не будут применимы.
0.2.9 Калибровка и расчет результатов
После определения порогового значения во время логарифмической фазы амплификации [например, от 0.01
до 0.1 нормализованной флуоресценции репортерного красителя (/?.)) программное обеспечение прибора рассчи
тывает значения С, для каждой реакции. Строят график зависимости значений С,, которые измерены для калибро
вочных точек, приготовленных из ССМ. предназначенных для количественных анализов (ССМ IRMM-413) в
ПЦР-системах. специфических для кукурузного таксона и MON 810. соответственно, от натурального логарифма
числа копий ДНК. Числа копий, измеренные для ДНК неизвестных образцов, получают интерполяцией из стандар
тных кривых.
Калибровочную кривую получают путем построения графика зависимости значений С, от логарифма числа
копий целевой последовательностидля калибровочных точек. Это может быть сделано, например, с помощью про
граммного обеспечения (электронной таблицы), такой как Microsoft Excel, или напрямую с использованием опций,
доступных в программном обеспечении системы детектирования последовательностей.
Для определения количества ДНК MON 810 в испытательном образце число копий MON 810 делится на число
эквивалентов кукурузного генома и умножается на 100. чтобы получить значение в процентах. Для получения вели
чины 1C см. [f 7).
В дополнение к прогону количественного анализа следует проводить факультативный, так называемый
контрольный прогон. Контрольный прогон должен быть также включен в межлабораторные испытания и он дол
жен еще улучшить процедуру анализа. Контрольный прогон наиболее важен при анализе матриксов, для которых
малоизвестны выход и качество ДНК. Тестируя в контрольном прогоне два различных разбавления экстрагиро
ванной нуклеиновой кислоты (например, разбавлений раствора ДНК 1.10 и 1:40). может быть обнаружено воз
можное присутствие ингибитора(ов) амплификации, а также может быть определено подходящее разбавление
экстракта нуклеиновой кислоты, полученной из испытательного образца, попадающее в калибровочный диапа зон
количественного анализа.
56