ГОСТ Р 53244— 2008
С.1.6.6 Температурно-временная программа
Температурно-временная программа, приведенная в таблице С.4, была оптимизирована для СДП ABI
PRISM* 7700 (Apptted Bkosystems). В исследовании по подтверждению достоверности метода СДП ABI PRISM417700
использовался совместно с AmpllTaq Gold*ДНК-лолимеразой. Использование других термоциклеров может потре
бовать специальной адаптации. Температура и время, необходимые для активации/инициации денатурации, зави
сят от особенностей используемой полимеразы.
Условия реакции приведены в таблице С.4.
Т а б л и ц а С.4 — Процедура, условия реакции
Э
та
пы
о
п
р
е
д
е
л
е
ния
Время, с
Температура. ’С
Пред-ЛЦР: деконтаминация
120
50
Пред-ПЦР: активация ДНК-полимеразы и денатурация кодирующей нити ДНК
600
95
ПЦР (45 циклов)
Стадия 1
Денатурация1595
Стадия 2
Отжиги элонгация6060
С.1.7 Ограничения и интерпретация результатов
Поскольку ГМО иные, чем соя линии GTS 40-3-2. они могут содержать часть трансгена, использовавшегося
для конструирования сои линии GTS 40-3-2. в частности. 35Б-промотор. СТР-последовательность из
Pe
t
un
ia
hy
brid
s
и специфический участок соединения между этими двумя генетическими элементами, метод пригоден для
количественного определения ДНК сои линии GTS 40-3-2 в отсутствие других ГМО. как определено выше.
Приведенный метод пригоден для измерения соотношения ДНК из сои линии GTS 40-3-2 и ДНК обычной сои.
Это соотношение отражает количество сои линии GTS 40-3-2 в соевом ингредиенте исследуемого пищевого про
дукта.
Если количество соевого ингредиента в исследуемом пищевом продукте превышает 5 %. маловероятно, что
содержание 1 % сои линии GTS 40-3-2 может быть определено.
П р и м е ч а н и е — Если обработка пищевого продукта в ходе его приготовления привела кдеградации или
удалению ДНК (например, при получении рафинированного соевого масла или рафинированных соевых лектинов),
описанный метод не дает достоверных результатов.
С.1.8 Калибровка и расчет результатов
После определения порогового
з
н
а
ч
е
ния
(например, от 0.01 до 0.1 нормализованной флуоресценции репор-
терного красителя (R.J)система детектирования последовательностей рассчитывает значения С, (число пороговых
циклов) для каждой ПЦР (метод ДДС,). Рассчитывают различия между значениями С, образцов (ДС, o6p) и стандар
тных образцов (ДС, „). Относительное количество ДНК сои линии GTS 40-3-2 в образце
t
v
,
%
,
относительно стан
дартного материала рассчитывают по формуле
<
с
vv
= 2 <
a w
л
С, , , -
с
сг.
(С-1)
где сс, — концентрация стандартного образца.
Альтернативным образом калибровочная кривая рассчитывалась (tog (с) относительно С,] системой детекти
рования последовательностей на основе стандартов, состоящих из смесей ГМО известных концентраций генети
чески модифицированной сои линии GTS 40-3-2 (например. 0.1 %; 0.5 %. 1 %; 2 % и 5 %) или стандартов,
состоящих из подходящих разбавлений стандартных растворов, полученных из смесей ГМО с определенной
концентрацией сои линии GTS 40-3-2 (например. 5 %). — метод двойной калибровочной кривой. Эту
калибровочную кривую приме няют для определения концентрации сои линии GTS 40-3-2 а неизвестном образце.
Поскольку ДНК образца может быть деградирована вследствие процесса приготовления пищевого продукта или
из-за того, что образец может со держать ингредиенты иные, чем соевые бобы, рассчитанная концентрация сои
линии GTS 40-3-2 должна быть нор мализована а соответствии с количеством амллифицируемой соевой ДНК.
присутствующей в образце. Это количество определяют с помощью ПЦР в реальном времени, специфической
для гена соевого лектина, с исполь зованием в качестве стандартной ДНКсмесей ДНКопределенной
концентрации (например. 100 %. 50%. 25%. 10% и 1% по массе)соевой ДНК из серии IRMM 410 или 410R.
разбавленных подходящей ДНК-носителем.Для нормали зации измеренное количество ДНК сои линии GTS 40-3-
2 делится на измеренное количество соевой ДНК.
Для этой альтернативной процедуры для расчета результатов важно, чтобы абсолютное количество кодиру
ющей нити ДНК (нг) было одинаковым для каждой ПЦР. использованной для калибровки.
Другая альтернативная процедура приведена в С.2.
21