ГОСТ Р 53244— 2008
вой последовательности и таксон-специфической последовательности из соответствующего стандартного
материала.
Ограничения см. в С.4.8.
С.4.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров
С.4.2.1 Общие положения
Этот метод был оптимизирован для приборов СДП ABI PRISM® 7700 ПЦР в реапьном времени с использова
нием плазмиды pMulSL2 в качестве стандартного материала [28}. Плазмида pMulSL2 включает, в частности,
ПЦР-продукты. амплифицированные из систем ПЦР для специфической амплификации таксон-специфичесхой по
следовательности из соевых бобов (Le1) и последовательности, специфической для конструкции сои линии
GTS 40-3-2.
П р и м е ч а н и е — Плазмида использовалась в качестве калибровочного вещества для определения со
держания ГN40, рассчитанного из относительного числа копий ГМ-специфической и таксон-специфической после
довательностей ДНК.
Воспроизводимость и точность описанного метода была проверена в ходе совместных испытаний лаборато
рий с использованием стандартных материалов и неизвестных образцов высушенной муки семян сои. содержав
ших смеси сои линии GTS 40-3-2 и обычной сои
[29]
.
Число копий таксон-специфической последовательности <Le1J в расчете на геном оценивалось для 10 пред
ставительных разновидностей сои.
Метод был опубликован в японском и корейском национальных стандартах (30), (31), [32]. [33}.
С.4.2.2 Совместные испытания лабораторий
Шесть пар неизвестных образцов сои, содержавшихот 0 % до 10 % (по массе) высушенной соевой муки, полу
ченной из сои линии GTS 40-3-2, были проанализированы пятнадцатью участниками.
П р и м е ч а н и е — Для валидации были приготовлены неизвестные образцы смесей соевой муки, которые
содержали 0 %, 0.1 %.0.5%. 1.5 % и 10 % (по массе) сухой соевой муки, полученной из сои линии GTS 40-3-2. Гомо
генность образцов на каждом уровне была протестирована с использованием количественного метода в соотве
тствии с протоколом АОАС [34).
Валидация метода для GTS 40-3-2 была проведена путем совместного испытания лабораторий в соотве
тствии с протоколом АОАС [29), [34]. Совместное испытание лабораторий было организовано Национальным ин
ститутом исследования продуктов питания (NFRI, Tsukuba. Япония) совместно с Центром маркировки качества
пищевых продуктов и услуг потребителям. Saltama. Япония, и Национальным институтом здравоохранения
(National Institute of Health Sciences). Япония. 15 участников из Японии. Республики Корея и Соединенных Штатов
Америки проводили это совместное испытание с использованием СДП ABI PRISM* 7700 (Applied Blosystems) в две
отдельные стадии. От всех участников требовалось следовать процедурам экстракции ДНК и количественной ПЦР.
Первая стадия имела своей целью определение Cfдля GTS 40-3-2. Все участники получили набор праймеров, зон дов.
стандартный материал и ДНК. экстрагированную из семян сои пинии GTS 40-3-2. которые были приготовлены Qlagen
DNA Easy Plan! Maxlkll. Эта ДНК использовалась для измерения числа копий в каждой специфической для конструкции
и таксон-специфической для сои последовательности ДНК. Все измерения на этой стадии были повто рены три раза.
От участников было получено всего 135 данных. Корреляции калибровочных кривых, к которым были приложены
данные от всех участников, были приемлемыми (г>0,990). В соответствии с протоколом АОАС [34J.
лаборатории, чьи данные были признаны «выбросами*, должны быть удалены как имеющие экстре
мальные значения (тест Кохрана, р < 0.025) и экстремальный средний уровень (тест Груббса. р < 0.025). Ни одного
«выброса» не наблюдалось, как это показано в таблице
С
.
11
.
Т а б л и ц а С
.
11
— Сводные данные
C
f
Целевая последовательность
Последовательность, специфическая для конструкции
GTS 40-3-2
Число участвовавших лабораторий
15
Число выбросов по тесту Кохрана
0
Число выбросов по тесту Груббса
0
Число оставшихся лабораторий
15
Cf-
0.95 ± 0.02
“ Выражено как среднее значение
t
доверительный интервал (а = 0.05).
Значение
C
f
может быть повторно определено исследователями с использованием подходящих стандар
тных материалов сои линии GTS 40-3-2.
28