ГОСТ Р 53244— 2008
Метод приведен для суммарного объема реакционной смеси ПЦР 50 мкл с реактивами, приведенными в таб
лицах С.8 и С.9.
Т а б л и ц а С.8 — Реакционная смесь амплификации, окончательный объем и концентрации в расчете на одну
реакционную пробирку для целевой таксон-специфической последовательности
Суммарный объем50 мкл
Добавленная кодирующая нить ДНК (от 1.7 до 108 нг соевой ДНК)5 мкл
ДНК-полимераза
ДНК-полимераза AmpllTaq Gold’ *
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
ДУТФ
Урацил-А/-гликозилаза
400 мкмоль/дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
Буфер А TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROXf
1-
Щ
С
\
,
4.5 ммоль/дм3
Праймеры
GM1-F и GM1-R (см. таблицу С.7)
См.таблицу С.7
ДНТФ
дАТФ. дЦТФ. дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
GM1 (см. таблицу С.7)
См.таблицу С.7
Н20 (для молекулярной биологии) Добавляется
до 50 мкл
‘ В случае использования системы LightCycler* рекомендуется альтернативный буфер и Taq-полимераза. на
пример, Platinum Taq или FastStart Taq в реакционном буфере производителя.
ь ROX — карбокси-Х-родамин.
Т а б л и ц а С.9 — Реакционная смесь амплификации, окончательный объем и концентрации в расчете на одну
реакционную пробирку для целевой последовательности ГМО
Суммарный объем50 мкл
Добавленная кодирующая нить ДНК (от 1.7 до 108 нг соевой ДНК)5 мкл
ДНК-полимераза
ДНК-полимераза AmpllTaq Gold®*
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
ДУТФ
Урацил-1У-гликозилаза
400 мкмоль/дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
Буфер A TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROXf
1-
4.5 ммоль/дм3
RR1-F и RR1-R (см. таблицу С.7)
См. таблицу С.7
Mgci,
Праймеры
дНТФ
дАТФ. дЦТФ.дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
RRt (см. таблицу С.7)
См. таблицу С.7
Н20 (для молекулярной биологии) Добавляется
до 50 мкл
* В случае использования системы LightCycler* рекомендуется альтернативный буфер и Taq-лолимераза. на
пример, Platinum Taq или FastStart Taq в реакционном буфере производителя.
ь ROX — карбокси-Х-родамин.
С.2.7.2 Контроли ПЦР
В качестве положительного контроля могут быть использованы сертифицированные стандартные материа
лы генетически модифицированной сои GTS 40-3-2. производимые IRMM. Geel, Бельгия (серии IRMM-410) (
21]
.
Следует провести все соответствующие контроли. как это описано в
ГО
С
Т
Р
5
3214
.
С.2.7.3 Температурно-временная программа
Температурно-временная программа, приведенная в таблице С.10. была оптимизирована для СДП ABI
PRISM’ 7700 (Applied Biosystemsjn системы LightCycler* (Roche Diagnostics). В валидационном исследовании ABI
PRISM*’ 7700 использовался совместно с ДНК-полимеразой AmpllTaq Gold’. Использование других термоциклеров
может потребовать специальной адаптации. Время, необходимое для активации/инициации денатурации, зависит от
особенностей используемой полимеразы.
Условия реакции приведены в таблице С.10.
26