ГОСТ Р 53244— 2008
C.S.8 Ограничения и интерпретация результатов
Та* как разные линии ГМ-кукурузы.а не только кукуруза линии MON 810, могут содержать ту же самую специ
фическую для конструкции последовательность ДНК. метод пригоден только для количественного определения
ДНК кукурузы линии MON 810 е отсутствие ГМО, иных, чем кукуруза линии MON 810.
Приведенный метод пригоден только для определения соотношения последовательности, специфической
для конструкции линии MON 810. и таксон-специфической zSS/to-последовательности кукурузы. Это соотношение
отражает количество MON 810 в исследуемом образце кукурузы. Этот метод был валидирован только для зерен ку
курузы.
Совместное испытание лабораторий является значимым источником данных для обеспечения оценки по
грешности. Также необходимо идентифицировать любые источники погрешностей, которые не охватываются меж
лабораторными испытаниями, такие как отбор проб и др.. а соответствии с [39]. (40).
С.5.9 Калибровка и расчет результатов
Исследователем должно быть определено пороговое значение для определения порогового цикла (С,). При
мер процедуры после ПЦР-анализа можно найти а руководстве производителя к стандартным материалам ГМ-ку-
курузы (GM Maize Detection Plasmid Set (Fasmac No. PS-2 и Nippon Gene No. 319-04981). См. также ссылку (28).
Конверсионный фактор (С/) для количественного определения конструкции, специфической для линии
MON 810. и рвференсной плазмиды, использовавшихся а совместном испытании лабораторий, равен 0.38. Расчет
количества ГМ-кукурузы в матриксе образца w. %. проводят по формуле
» s00
(
С
.
З)
ы,х а
’
где Wftw— число копий ГМ-специфической целевой последовательности ДНК испытательного образца;
Nrx — число копий таксон-специфической целевой последовательности ДНК испытательного образца.
Разделы С.в. С.7. Не включены (см. предисловие).
С.8 Метод количественного определения содержания ДНК кукурузы линии GA21 (специфический для
конструкции) с использованием ПЦР в реальном времени
С.8.1 Введение
В этом приложении приведен метод обнаружения и количественного определения таксон-специфического
гена кукурузы (ген синтазы крахмала кукурузы. ИЬ:
zSSIIb
) и специфического участка ДНК-конструкции — места сое
динения между оптимизированной последовательностью транзитного пептида и геном 5-енолпирувилшики-
мат-3-фосфат-синтазы (m-epsps) кукурузы, присутствующего в ГМ-кукурузелинии GA21. на основе ПЦР в реальном
времени с использованием плазмиды в качестве стандартного материала для определения относительного коли
чества GA21 с применением конверсионного фактора (СО- представляющего собой отношение числа копий, специ
фических для конструкции и таксон-специфических последовательностей ДНК в репрезентативном образце семян
истинной кукурузы линии GA21.
П р и м е ч а н и е —
C
f
используется для расчета содержания ГМО (мае. %) из числа копий ДНК ГМО целе
вой и таксон-специфической последовательностей
C
f
может быть измерен как отношение числа копий для целе
вой последовательности и таксон-специфической последовательности из соответствующего стандартного
материала.
Ограничения см. в С.8.8.
С.8.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров
С.8.2.1 Общие положения
Этот метод был оптимизирован для приборов СДП ABI PRISM*’ 7700 ПЦР в реальном времени с использова
нием плазмиды рМи!5 в качестве стандартного материала (28). Плазмида рМи!5 включает, в частности, ЛЦР-про-
дукты. амплифицированные из систем ПЦР для специфической амплификации таксон-специфической
последовательности из кукурузы (
zSSIIb
). последовательности 35Э-промотора вируса мозаики цветной капусты
(p35S), терминаторной последовательности нопалин-синтазы (tNOS), и последовательности, специфической для
конструкций MON 810. Event176. ВИ1. GA21 и Т25.
П р и м е ч а н и е — Плазмида использовалась в качестве калибровочного материала для определения со
держания ГМО. рассчитанного из относительного числа копий ГМ-специфической и таксон-специфической после
довательностей ДНК.
Воспроизводимость и точность описанного метода была проверена в ходе совместных испытаний лаборато
рий с использованием стандартных материалов и неизвестных образцов высушенной муки семян кукурузы, содер
жавших смеси зерен линии GA21 и обычной кукурузы (29).
Число копий таксон-специфической последовательности (
zSSIIb
) в расчете на геном оценивалось для
20 представительных разновидностей кукурузы.
Метод был опубликован а японском и корейском национальных стандартах (30). (31). (32). (33).