ГОСТ Р 53244— 2008
С.2 Метод количественного определения содержания сои линии GTS 40-3-2 (специфический для
конструкции) с использованием ПЦР в реальном времени (метод 2)
С.2.1 Введение
В этом приложении приведен метод специфической амплификации и обнаружения таксон-специфического
гена сои (ген лектина. 1е1) и специфического участка генной конструкции — места соединения ДНК 35S-npoMOTopa
вируса мозаики цветной капусты и хлоропластного сигнала
Pe
t
un
ia
hy
brid
s,
предшествующего последовательности
гена 5-еиоллирувилшикимат-З-фосфат-синтазы
A
grobact
e
ri
um
{
e
p
s
p
s
). присутствующего в генетически модифици
рованной сое линии GTS 40-3-2 (Roundup Ready®) для количественного определения относительного количества
ДНК. происходящей из генетически модифицированной сои линии GTS 40-3-2.
Ограничения см. в С.2.8.
С.2.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров
С.2.2.1 Общие положения
Метод был оптимизирован для приборов для ПЦР в реальном времени с использованием сертифициован-
ных стандартных материалов (ССМ IRMM-410R) (21). состоящих из высушенной муки соевых бобов, включающих
смеси сои линии GTS 40-3-2 и обычной сои.
Воспроизводимость и точность приведенного метода была проверена в ходе совместных испытаний лабора
торий с использованием неизвестных образцов, состоявших из упомянутых выше стандартных материалов. Кроме
того, были протестированы обработанные стандартные материалы текстурированного растительногобелка (ТРБ).
Число копий каждой из целевых последовательностей на геном подробно оценено не было.
С.2.2.2 Совместные испытания лабораторий
Шесть неизвестных образцов, содержавших от 0.1 % до 5 % (по массе) упомянутых выше сертифицирован
ных стандартных материалов (ССМ IRMM-410R) и ТРБ. содержавшего 2 % (по массе) сои линии GTS 40-3-2. были
проанализированы.
- 14 лабораториями, использовавшими СДП ABI PRISM® 7700.
- шестью лабораториями, использовавшими СДП ABI GeneAmp® 5700.
- 12 лабораториями, использовавшими систему LightCycler* (Roche Diagnostics).
Число участников, как и число образцов, было в соответствии с
ГО
С
Т
Р
5725
-
6
.
Система, специфическая для конструкции GTS 40-3-2. дала относительное стандартное отклонение воспро
изводимости в диапазоне от 27 % до 44 % при использовании аппаратов СДП ABI PRISM* 7700 и СДП ABI
GeneAmp* 5700. соответственно, ив диапазоне от 27 % до 64 % при использовании LightCycter*(Roche Diagnostics).
Для экстракции ДНК использовалась процедура, описанная в ИСО 21571 (2). раздел А.З.
Для каждого образца параллельно анализировались два экстракта ДНК. Каждый испытательный образец
был проанализирован в трех повторностях.
Точность метода, достоверность и предел количественного определения определялись в ходе совместного
испытания лабораторий. Данные специфичности, линейности и пределов детектирования и количественного опре
деления были установлены до совместного испытания лабораторий. Содержание ДНК в испытательных образцах
охватывало эти величины.
Данные валидации достоверности и точности приведены в таблицах С.5 и С.6.
Т а б л и ц а С.5 — Данные валидации для СДП ABI PRISM* 7700 и СДП ABI GeneAmp’5’ 5700 за 2000 год
Н
а
и
м
е
н
ова
ни
е
п
о
к
азат
е
ля
Образец 1
0.10% 4
0.03%
Образец 2
0.50
%±
0.06%
Образец 3
1.0% 4
0.1 %
Образец 4
2.0 %t
0.2
%
Образец 5
5.0% t
0,2%
Образец 6
2 % ТРБ
Число участвовавших лабора
торий
19
19
19
19
19
19
Число выбросов*
0
2
1
0
1
0
Число лабораторий, оставших
ся после исключения выбросов
19
17
18
19
18
19
Среднее значение. %
0.11
0.49
1.00
2.27
5.11
1.71
Стандартное отклонение повто
ряемости
s,
“
0.04
0.12
0.21
0.25
0.53
0.48
Относительное стандартное от
клонение повторяемости. %
33
24
21
11
10
28
Предел повторяемости
г(г= 2.8 а,)
0,10
0.33
0.59
0.71
1.48
1.34
22