ГОСТ Р 53244— 2008
С.1.6.2 Термоциклер
Отмеченный температурно-временной профиль изначально был оттестирован при помощи приборов СДП
ABI PRISM® 7700 (Applied Biosystems) и СДП GeneAmp® 5700 (Applied Biosystems). Допускается использовать дру
гие системы СДП ПЦР в реальном времени после адаптации реакционных условий.
С.1.6.3 Реакционные пробирки
Реакционные пробирки должны быть подходящими для ПЦР-амппификации в термоциклере, например, ABI
PRISM® 96-Well Optical Reaction Plate или MicroAmp® Optical Caps (восемь крышех/лолоска. плоская) (Applied
Biosystems).
Д
о
пу
с
к
а
е
тс
я
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
др
у
г
их
ср
е
дств
и
зм
е
р
е
ний
с м
е
тро
л
ог
ич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
,
а та
к
ж
е
обор
у
дова
ния
и
р
е
а
к
т
и
вов с т
е
хнич
е
с
к
и
м
и
х
ара
к
т
е
р
и
ст
и
к
ам
и
н
е
ни
ж
е
в
ыш
е
у
к
аза
нных
,
е
с
ли
мож
е
т б
ы
ть
п
о
к
аза
н
о
.
ч
то
их
п
р
и
м
е
н
е
ни
е
п
р
и
вод
и
т
к
т
е
м ж
е
р
е
з
ул
ьтатам
.
С.1.6.4 Процедура: порядок проведения ПЦР
Порядок проведения ПЦР для целевой последовательности референсного гена и целевой последователь
ности ГМО
с
л
е
д
у
е
т
проводить в отдельных пробирках. Мультиплексная ПЦР (с использованием различных флуо
ресцентных меток для зондов) не была протестирована или валидирована.
Метод приведен для суммарного объема реакционной смеси ПЦР 50 мкл с реактивами, приведенными в таб
лице С.З.
Т а б л и ц а С.З — Окончательный объем реакционной смеси амплификации/концентрация на одну реакцион
ную пробирку
Целевая последовательность референсного гена
Суммарный объем50 мкл
Кодирующая нить ДНК (максимальное количество 200 нг)10 мкл
ДНК-лолимераза
AmpliTaq Gold*’
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
ДУТФ
Урацил-Л/-гликозилаза AmpErase®
400 мкмоль/дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
Буфер A TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROX)“
1-
M9CI,
5 ммоль/дм3
Праймеры
Лектин-F и Лектин-R (см. таблицу С.2)
См. таблицу С.2
дНТФ
дАТФ. дЦТФ. дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
Лектин-ТМР (см. таблицу С.2)
См. таблицу С.2
Целевая последовательность ГМО
Суммарный объем
50 мкл
Кодирующая нить ДНК (максимальное количество 200 нг)10 мкл
ДНК-лолимераза
AmpliTaq Gold*
1.25 ед.
Деконтаминационная
система
ДУТФ
Урацил-А/-гликозилаза AmpErase®
400 мкмоль/дм3
0.5 ед.
Реакционный буфер
Буфер A TaqMan* (содержащий пассивный стандартный ROX)*
1-
M9CI,
5 ммоль/дм3
Праймеры
RRS-F и RRS-R (см. таблицу С.2)
См. таблицу С.2
дНТФ
дАТФ. дЦТФ. дГТФ
200 мкмоль/дм3
каждого
Зонд
RRS-TMP (см. таблицу С.2)
См. таблицу С.2
" ROX — харбокси-Х-родамин.
С.1.6.5 Контроли ПЦР
В качестве положительного контроля и стандартного материала для калибровки могут быть использованы
сертифицированные стандартные материалы GTS 40-3-2 (материалы, содержащиеот 0.1 % до 5 % генетически мо
дифицированной сои), производимые IRMM. Geel. Бельгия (серии IRMM-410) (21).
Следует провести асе соответствующие контроли. как это предусмотрено а
ГО
С
Т
Р
53214.
20