ГОСТ Р 53244— 2008
С.4.8 Ограничения и интерпретация результатов
Так какразные линии ГМ-сои, а не только соя линии GTS 40-3-2. могут содержатьту же самую специфическую
для конструкции последовательность ДНК. метод пригоден только для количественного определения ДНК сои ли
нии GTS 40-3-2 в отсутствие ГМО иных, чем соя линии GTS 40-3-2.
Приведенный метод пригоден только для количественного определения сои линии GTS 40-3-2 в отсутствие
других ГМ-событий, содержащихся а этой конструкции. Это соотношение отражает количество сои линии GTS
40-3-2 в исследуемом образце сои. Этот метод был еалидирован только для сои.
Совместное испытание лабораторий является значимым источником данных для обеспечения оценки по
грешности. Также необходимо идентифицировать любые источники погрешностей, которые не охватываются меж
лабораторными испытаниями, такими как отбор проб и др., в соответствии с основными международными
договоренностями [39].
[40]
.
С.4.9 Калибровка и расчет результатов
Исследователем должно быть определено пороговое значение для определения порогового цикла (С,). При
мер процедуры после ПЦР-анализа можно найти в руководстве производителя кстандартным материалам ГМ-сои
(GM Soybean (RRS) Detection Plasmid Set(Fasmac No. PS-2 и Nippon Gene No. 310-04981]. См. также
[28]
.
Конверсионный фактор
(
C
f
)
для количественного определения конструкции, специфической для сои линии
GTS 40-3-2 и референсной плазмиды, использовавшихся в совместном испытании лабораторий, равен 0,95. Рас
чет количества RRS в образце сои
w
.
%, проводят по формуле
NC.w
100
"тх
C
f
(
С
.
2)
где
N
о
н
— число копий ГМ-специфической целевой последовательности ДНК испытательного образца;
N
г
х
— число копий таксон-специфической целевой последовательности ДНК испытательного образца.
C.S Метод количественного определения содержания ДНК кукурузы линии MON 810 (специфический
для конструкции) с использованием ПЦР в реальном времени
С.5.1 Введение
В этом приложении приведен методобнаружения и количественногоопределения таксон-специфичвского гена
кукурузы (ген синтазы крахмала кукурузы, lib.
zSSIIb
) и специфического участка ДНК-конструкции — места соедине ния
последовательности интрона гена белка теплового шока 70
(
Б
ТШ70)
кукурузы и синтетического гена
с/
у
Щ
Ь
)
.
про
исходящего из
Bacill
u
s
tb
u
ri
n
gi
e
n
s
i
s,
присутствующего в генетически модифицированной (ГМ) кукурузе линии
MON 810. на основе ПЦР в реальном времени с использованием плазмиды в качестве стандартного материала для
количественного определения количества MON 810 с применением конверсионного фактора (С/), представляющего
собой отношение числа копий, специфических для конструкции и таксон-специфических последовательностей ДНК в
репрезентативном образце семян истинной кукурузы линии MON 810.
П р и м е ч а н и е — Of используется для расчета содержания ГМО (мае. %) из числа копий ДНК ГМО целе
вой и таксон-специфической последовательностей.
C
f
может быть измерен как отношение числа копий для целе
вой последовательности и таксон-специфической последовательности из соответствующего стандартного
материала.
Ограничения см. в С.5.8.
С.5.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров
С.5.2.1 Общие положения
Этот метод был оптимизирован для приборов СДГ1ABl PRISM* 7700 ПЦР в реальном времени с использовани
ем плазмиды рМи15 в качестве стандартного материала [28]. Плазмида рМи15 включает, в частности. ПЦР-продукты.
амплифицированные из систем ПЦР для специфической амплификации таксон-специфической последовательности
из кукурузы (
zSSIIb
). последовательности 358-промотора вируса мозаики цветной капусты (p35S), терминаторной по
следовательности нопалин-синтазы (tNOS) и последовательности, специфической для конструкций MON 810.
Event176. B ill. GA21 и Т25.
П р и м е ч а н и е — Плазмида использовалась в качестве калибровочного материала для определения со
держания ГМО. рассчитанного из относительного числа копий ГМ-специфической и таксон-специфической после
довательностей ДНК.
Воспроизводимость и точность описанного метода была проверена а ходе совместных испытаний лаборато
рий с использованием стандартных материалов и неизвестных образцов высушенной муки семян кукурузы, содер
жавших смеси зерен линии MON 810 и обычной кукурузы [29].
Число копий твксон-специфической последовательности (
zSSIIb) в
расчете на геном оценивалось для двад
цати представительных разновидностей кукурузы.
Метод был опубликован а японском и корейском национальных стандартах [30]. [31]. [32]. [33].
33