ГОСТ Р 53244— 2008
Институтом исследования продуктов питания {NFRI. Tsukuba. Япония) совместно с Центром маркировки качества
пищевых продуктов и услуг потребителям. Саитама (Saitama). Япония и Национальным Институтом здравоохране
ния (National Institute of Health Sciences). Токио. Япония. 15 лабораторий, включая участников из Японии. Республи ки
Корея и Соединенных Штатов Америки, проводили это совместное испытание с использованием СДП ABI
PRISM*17700 (Applied Biosystems)e две отдельные стадии. От всех участников требовалось следовать процедурам
экстракции ДНК и количественной ПЦР.
Первая стадия имела своей целью определение С7для Т25. Все участники получили набор праймеров, зон
дов. стандартный материал и ДНК. экстрагированную из семян кукурузы линии Т25. которые были приготовлены из
QiagenONeasy Plant Maxi kit и чья пригодность была протестирована NFRI перед исследованием. Эти образцы ДНК
использовались для измерения числа копий конструкции, специфической для Т25 и таксон-специфической
zSSIlb
последовательности ДНК кукурузы. Все измерения на этой стадии были повторены три раза. От участников было
получено всего 90 комплектов данных. Корреляции калибровочных кривых, для которых были представлены дан
ные от всех участников, были приемлемыми (г > 0.990). В соответствии с протоколом АОАС [34] лаборатории, чьи
данные были признаны выбросами, должны быть удалены как имеющие экстремальные значения (тест Кохрана, р <
0.025) и как имеющие экстремальный средний уровень (тест Груббса.
р
< 0.025). Ни одного выброса не наблю далось
ни в одном из тестов, как это показано а таблице
С
.
29
.
Т а б л и ц а С.29 — Сводные данные
C
f
для Т25
Целевая последовательность
Последовательность, специфическая для конструкции Т25
Число участвовавших лабораторий
15
Число выбросов по тесту Кохрана
0
Число выбросов по тесту Груббса
0
Число оставшихся лабораторий
15
С
Г
0.34 ± 0.01
" Выражено как среднее значение ± доверительный интервал (« = 0.05).
Значение
C
f
может быть повторно определено исследователями с использованием подходящих стандар
тных материалов кукурузы линии Т25.
На второй стадии были проведены «слепые» анализы. Неизвестные образцы кукурузной муки были приго
товлены как шесть пар «слепых» дубликатов, которые содержали 0 %, 0.1 %. 0.5 %, 1®А. 5 % и 10 % (по массе) высу
шенной муки ГМ-кукурузы линии Т25 в смеси с обычной кукурузной мукой [29]. Образец, не содержавший кукурузы
линии Т25 (0 %), был использован как «пустой» образец, чтобы отсеять неработоспособные лаборатории перед
статистическим анализом. Участники были проинструктированы экстрагировать ДНК из образцов с использовани
ем набора Qiagen. Данные, представленные лабораториями, оставшимися в испытаниях после тестов на выбросы,
были использованы для расчета среднего значения ГМО идоверительного интервала (а ■ 0.05). Средние значения
были определены как С/для расчета количества ГМО (%) в ходе «слепого» анализа. Средняя величина С7для ко
личественного определения последовательности, специфической для конструкции Т25. составляла 0,34.
14 лабораторий, участвовавших во второй стадии, проанализировали 168 образцов путем амплификации
zSSIlb
и последовательности, специфической для конструкции Т25. Лаборатории, которые не смогли определить
пустые образцы с содержанием кукурузы линии Т25 0 %. были расценены как неработоспособные, и асе их данные
были исключены еще до тестов на выбросы. Во всех экспериментах корреляции калибровочных кривых были при
емлемыми (г> 0.990). Лаборатории, показавшие экстремальные отклонения и экстремальные средние значения
данных в парах «слепых» дубликатов с разными уровнями Т25. были исключены из испытания как выбросы по Кох
рануи выбросы по Груббсу [35]. [36]. соответственно, еще перед статистическим анализом достоверности и точнос ти.
В полученных данных было обнаружено два выброса по Кохрану. Рассчитанные средние значения содержания
ГМО. отклонение, относительное стандартное отклонение повторяемости (%) и относительное стандартное откло
нение воспроизводимости (%) для каждого уровня ГМО в смеси приведены в таблице С
.
30
.
П р и м е ч а н и е — Участники совместных испытаний не рассчитывали окончательные результаты с ис
пользованием значения
C
f
.
определенного в ходе первого совместного испытания. Число копий для каждой целе вой
последовательности, полученное при определении значений
C
f
и проведении «слепых* анализов, было
передано в NFRI и содержание ГМО (%)в «слепых» испытательных образцах было преобразовано в окончатель ные
результаты с использованием значений
C
f
.
46