ГОСТ ISO 11133—2016
готовленной суспензии должна быть стабильной и однородной в течение периода ее использования в
соответствии с [7]. [101, [111. [21]. [29]. [30].
Допускается применение различных методик для обеспечения чистоты инокулята, его стандарти
зации. что позволит использовать его на последующих стадиях.
В зависимости от размера колоний отбирают одну или две колонии от среды с исходной культурой
при помощи петли. Во избежание забора слишком большого количества инокулята рекомендуется ис
пользовать петлю, позволяющую отбирать 1 мм3материала.
Инокулят переносят в неселективную жидкую среду (например, в триптонный соевый бульон
[гдв]) и тщательно перемешивают.
Инкубируют в подходящих условиях в течение необходимого времени (например. 18—24 ч при
температуре 37 °С в случае большинства аэробных бактерий).
Данную рабочую культуру используют в течение установленного времени (например, в течение
максимум трех дней при соответствующей температуре, чтобы не допустить значительных изменений в
структуре микроорганизмов).
Информация, касающаяся приготовления и хранения спор бактерий и грибков, используемых в
качестве рабочих культур, приведена в [10]. [11], [24]. [25]. [30].
5.4.2.3 Приготовление суспензий (инокулята) для испытаний
Серию разведений готовят в разбавителе (например, в растворе Ringerс концентрацией, снижен
ной в четыре раза, пептонном солевом растворе), при этом выбирают самый оптимальный шаг разве
дения для получения требуемого количества микроорганизмов (КОЕ) в установленном объеме.
Разведение, требуемое для использования в качестве инокулята в испытаниях, определяют на
основе предыдущих испытаний, все стадии которых проводились в четко определенных стандартизо
ванных условиях.
Суспензию (инокулят) используют в течение установленного времени (например, в течение 2 ч
при комнатной температуре или в теченио 24 ч при хранении при температуре (5 ± 3) °С: допускаются
более длительные периоды хранения, если была произведена проверка пригодности материала в со
ответствии с [10]. [21]).
Допускается использование замороженного инокулята, если будет показано, что данный микро
организм способен выживать при низких температурах в течение установленного периода.
5.4.2.4 Объем инокулята
Объем инокулята, используемый для проведения количественных эксплуатационных испытаний,
должен соотноситься с объемом, используемым в условиях испытаний для соответствующих сред.
В случае разбавителей и жидких сред, используемых для количественных испытаний, объем ино
кулята должен быть пропорционален объемам, используемым при применении соответствующих стан
дартов. и составляет 10 % от объема исследуемой среды.
5.4.2.5 Концентрация микроорганизмов в инокуляте
5.4.2.5.1 Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на производительность
5.4.2.5.1.1 Количественное испытание
В случае количественного испытания, когда проводят подсчет микроорганизмов, для достижения
приемлемой точности требуется концентрация микроорганизмов приблизительно 102 КОЕ (см. таблицу 1).
Для этого может потребоваться несколько чашек Петри.
Целесообразно применять диапазон от 80 до 120 КОЕ на чашку с минимальным количеством,
равным 50 КОЕ на чашку. При использовании фильтров требуется то же самое количество КОЕ (исполь
зуют один или несколько фильтров). В таблице 1 приведены значения 95-процентных доверительных
интервалов, имеющих отношение к подсчету колоний.
Вслучав количественных испытаний разбавителей ижидких транспортных срод необходимая кон
центрация микроорганизмов в инокуляте должна быть от 103 до 104 КОЕ. чтобы концентрация, равная
приблизительно 100 КОЕ. была в объеме, распределяемом по чашкам.
Таблица 1 — Пределы 95-процентных доверительных интервалов для количества колоний, подчиняющихся
распределению Пуассона по [21], [26]
Количество подсчитанных колоний
Предельная точность
(Сточностью до процента)
Приблизительные пределы 95-процект-
иых доверительных интервалов
500
±9
455—545
400
± 10
360—440
15