ГОСТ ISO 11133—2016
4.3.4 Взвешивание и растворение
Соблюдая необходимые меры предосторожности, аккуратно взвешивают требуемое количество
обезвоженной среды или отдельных ингредиентов и постепенно смешивают с необходимым количе
ством воды, избегая образования комков. Соблюдают требуемый баланс: максимально допустимая
ошибка составляет 1 % или менее, как это установлено в ISO 7218 и ISO 8199. Если не указано иное,
ингредиенты добавляют к требуемому объему воды, а не доводят объем водой до нужного уровня.
4.3.5 Растворение и диспергирование
Если необходимо, для растворения обезвоженные среды требуется быстродиспергировать путем
периодического или постоянного перемешивания с последующим нагреванием. Средам, содержащим
агар, перед нагреванием с перемешиванием для растворения необходимо дать несколько минут на
пропитывание, и затем их разливают перед автоклавированием, если это необходимо. Следует избе
гать перегрева.
4.3.6 Измерение и регулирование pH
pH измеряют с помощью pH-метра и регулируют перед стерилизацией, если необходимо, так.
чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 °С среда имела требуемое значение pH
± 0,2 ед. pH. если нет иных указаний. Регулировку pH обычно осуществляют с помощью раствора
гидроксида натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/дм3 (примерно 1 моль/дм3) или раз
бавленной соляной кислоты (HCI) концентрацией приблизительно 36,5 г/дм3 (примерно 1 моль/дм3).
При регулировании pH среды после стерилизации используют стерильные растворы. Дополнительная
информация, касающаяся измерения pH, приведена о ISO 7218 и ISO 8199.
П ри м е ча н и е — Имеющиеся в продаже среды могут демонстрировать значительные изменения pH до
и после обработки в автоклаве. Однако при условии использования дистиллированной или деионизованной воды
надлежащего качества регулирование pH перед обработкой в автоклаве, как правило, не потребуется.
4.3.7 Разливка
Среду разливают посоответствующим емкостям, при этом оставляют достаточное свободное про
странство над средой во избежание выкипания среды в процессе охлаждения после тепловой обработ ки
при автоклавировании или переплавке либо перелива среды после внесения добавок.
П р и м е ч а н и е — Данное свободное пространство может не потребоваться, если в процессе охлаждения
в автоклаве поддерживается надлежащее давление.
4.3.8 Стерилизация
4.3.8.1 Общие положения
Готовые питательные среды стерилизуют в день приготовления.
Стерилизацию питательных сред и реактивов, как правило, проводят при помощи влажного пара
(см. 4.3.8.2) или фильтрации (см. 4.3.8.3).
Определенным средам для стерилизации не требуется обработка в автоклаве, их можно исполь
зовать после кипячения. Например, среды для выращивания Enterobacteriaceae. содержащие брил
лиантовый зеленый, особенно чувствительны к нагреванию и действию света, и после кипения их
необходимо быстро охладить и защищать от интенсивного света. Некоторые реактивы также могут ис
пользоваться без стерилизации. В любом случае необходимо ссылаться на соответствующий стандарт
или инструкции изготовителя.
4.3.8.2 Стерилизация влажным паром
Стерилизацию влажным паром выполняют в автоклаве или специальном аппарате для приготов
ления питательных сред.
Для объемов свыше 1000 см3 режим стерилизации в автоклаве адаптируют соответствующим
образом, чтобы обеспечить надлежащую тепловую обработку. В любом случае необходимо следовать
положениям соответствующего стандарта или инструкциям изготовителя.
П р и м е ч а н и е — Если в автоклаве обрабатывают большие объемы сред (> 1000 см3), может произойти
перегрев.
После нагревания необходимо дать средам остыть таким образом, чтобы предотвратить выкипа
ние. Это особенно важно для сред в большом объеме и для сред, содержащих чувствительные к воз
действию тепла ингредиенты, например, сред с бриллиантовым зеленым.
Дополнительная информация по стерилизации влажным паром приведена в ISO 7218 и в [11].
Стерилизацию паром оценивают при помощи значений F0, принимая во внимание обработку па
ром в процессе нагрева и охлаждения. Параметры тепловой обработки необходимо определить для
9