ГОСТ ISO 7218—2015
12.3.2.4 Раствор сафранина
12.3.2.4.1 Состав:
сафранин — 0.25 г;
этиловый спирт (95 %) — 10 см3;
вода — 100 см3.
12.3.2.4.2 Приготовление
Растворяют сафранин в этиловом спирте, затем смешивают с дистиллированной водой.
12.3.3 Техника окрашивания
После фиксации на предметном стекле бактериального мазка, приготовленного из
18 — 24 -часовой культуры или мутного бульона, заливают мазок раствором кристаллического фио
летового. Оставляют на 1 мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают в течение нескольких секунд водой.
Наносят на стекло раствор йода. Оставляют на 1 мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают водой в течение нескольких секунд.
Стекло в наклонном положении осторожно и непрерывно промывают этанолом (95 %) в течение
не более 30 с до прекращения вымывания фиолетового красителя.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают водой для удаления этилового спирта.
Наносят на стекло раствор сафранина и оставляют на 10 с. Стекло под наклоном осторожно промы
вают водой.
Высушивают стекло.
12.3.4 Оценка результатов
Окрашенный мазок просматривают под микроскопом, используя для этого светосильный объек
тив с масляной иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, отно
сят к грамположительным (Грам +): другие, окрашенные в цвета от темно-розового до красного, отно
сят к грамотрицательным (Грам -).
У чистых культур некоторых типов бактерий в поле микроскопа могут присутствовать как грам-
положительные. так и грамотрицательные клетки.
П р и м е ч а н и е — Плотные скопления клетокмогутдаватьнетипичную картинуокрашивания.
12.4 Использование биохимических наборов для идентификации
Можно использовать имеющиеся биохимические наборы для идентификации изолированных
колоний.
Проверяют пригодность биохимических наборов, как показано в ходе оценочных исследований,
опубликованных в международной научной литературе, касающейся предпочтительно микробиологии
пищевых продуктов1’. Такая проверка особенно важна, если изготовитель не имеет данных об адек
ватности своих наборов.
Лаборатория должна получить сертификат контроля на каждую партию с указанием испытан
ных штаммов.
Изготовитель должен также определить контрольные штаммы, которые лаборатория может ис
пользовать для проверки сохранности характеристик биохимических наборов.
Наборы должны включать, как минимум, биохимические тесты, описанные в соответствующих
стандартах, или к ним должны прилагаться другие тесты.
12.5 Применение нуклеиновых зондов для идентификации
Имеющиеся в настоящее время нуклеиновые зонды можно использовать для идентификации
изолированных колоний.
Необходимо проверить, чтобы нуклеиновые зонды, используемые для идентификации, были
пригодны, как показывают оценочные исследования, опубликованные в международной научной ли
тературе. предпочтительно касающейся микробиологии пищевых продуктов (см., например. (23)). Та
кая проверка особенно важна, если изготовитель не предоставляет данных об адекватности этих
зондов.
Лаборатория должна получить сертификат контроля на каждую партию с указанием
испытанных штаммов.
11 Запросы об информации следует направлять в национальные, региональные или международные спра
вочные центры, указанныедля каждого микроорганизма.
46