ГОСТ ISO 7218—2015
- открывании ампул, содержащих лиофилизированные культуры.
Таким образом, их формирование необходимо свести к минимуму.
При использовании молекулярных методов необходимо соблюдать дополнительные меры
предосторожности в соответствии с ISO 22174.
9.2 Приготовление исходной суспензии и разведений
9.2.1 Общие положения
Исходную суспензию и разведения приготавливают согласно соответствующей части ISO 6887.
Интервал времени между моментом окончания приготовления исходной суспензии и моментом ино
куляции посевного материала в питательную среду не должен превышать 45 мин. если он специаль но
не оговаривается в соответствующем стандарте.
За этапом приготовления исходной суспензии и получения разведений может следовать этап
обогащения в соответствии с конкретными стандартами.
9.2.2 Концентрирование
9.2.2.1 Центрифугирование или фильтрация с помощью мембранного фильтра
Если требуется подсчет малого числа микроорганизмов, подсчет может быть улучшен как с
точки зрения чувствительности, так и точности посредством введения дополнительного этапа концен
трирования анализируемой пробы. Концентрация при этом может быть достигнута центрифугирова
нием или фильтрацией на мембранных фильтрах.
При использовании центрифугирования полученный осадок повторно растворяют в меньшем
объеме растворителя и продолжают исследование.
Для каждой рассматриваемой комбинации (пищевой продукт плюс микроорганизм) (см. напри
мер. [23)) необходимо предварительно установить, является ли введение этапа концентрирования
необходимым и правомерным. Следует оценить способность к фильтрованию суспензии пищевого
продукта.
Необходимо также проверить выполнение этапа концентрирования в отношении чувствитель
ности. селективности, линейности и воспроизводимости. Если уровень загрязнения неизвестен, па
раллельно необходимо провести исследование стандартным методом (без фильтрации).
9.2.2.2 Иммуноразделение
Если в пробе присутствуют малые количества интересующих микроорганизмов, разделение и
концентрирования микроорганизмов может быть достигнута с помощью иммуномагнитных шариков,
покрытых специфическими антителами.
Шарики распределяют, вместе с выделенными интересующими микроорганизмами, непосред
ственно на конкретной плотной питательной среде в соответствии с конкретными нормативными
стандартами. Следует проверить, что иммуномагнитные шарики, покрытые специфическими, исполь
зуемыми на этом этапе концентрирования антителами, удовлетворяют требованиям, определенным
при оценочных испытаниях, проведенным согласно методам, опубликованным в международной
научной литературе, касающейся, главным образом, микробиологии пищевых продуктов. Эта провер ка
особенно важна, если этот метод не был утвержден в соответствии с ISO 16140-2.
10 Подсчет
10.1 Общие положения
При оценке микробиологического качества и/или безопасности пищевых продуктов и кормов
для животных часто недостаточно только знать, какие микроорганизмы присутствуют в пробе. В
большинстве случаев количественный аспект не менее важен, и это требует необходимости подсчета
микроорганизмов. Подсчет можно выполнить различными способами: с помощью прямого определе
ния (микроскопия), посевом на плотные или жидкие питательные среды, с помощью проточной цито
метрии. в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и т. д. Однако в настоящем
стандарте рассматривается только подсчет микроорганизмов на плотных и жидких питательных сре
дах.
Подсчет на плотных питательных средах основан на способности многих микроорганизмов об
разовывать колонии на или в агаровых питательных средах, которые можно распознать невооружен
ным глазом или с помощью простой лупы.
Однако если матрица содержит много частиц, которые могут повлиять на обнаружение колоний,
они должны быть предварительно отделены путем установки или использования рукавов с филь
тром.
29