ГОСТ ISO 7218—2015
Используют предварительно заполненные агаровой средой чашки, толщина агарового слоя ко
торых составляет не менее 3 мм. Слой агара должен быть ровным и не содержать пузырьков воздуха и
поверхностной влаги.
Чтобы облегчить равномерное распределение, поверхность затвердевшего агара необходимо
подсушить в соответствии с ISO 11133 или в соответствии с другим соответствующим стандартом. В
таком случае посевной материал абсорбируют в течение 15 мин.
10.2.4.2 Метод посева с помощью шпателя
С помощью стерильной пипетки инокулят жидкой пробы или исходной суспензии в случае дру
гих проб (обычно от 0.1 до 0.5 см3) переносят на агаровую среду в чашки Петри (диаметром 90 или
140 мм. соответственно). Данную процедуру повторяют для следующего десятичного разведения (ко
лонии. подлежащие подсчету, тогда будут представлены в степени разбавления 10 -2в случае
мате риала жидкой пробы и 10-2 в случае материала другой пробы) и, при необходимости,
повторяют дальнейшие десятичные разведения.
Если необходимо подсчитать незначительное количество микроорганизмов в определенных
продуктах, предел обнаружения можно увеличить в десять раз посредством анализа 1.0 см3пробы в
случае жидких продуктов и 1,0 см3 исходной суспензии в случае других продуктов. Для этой цели.
1.0 см3 посевного материала распределяют или по поверхности большой чашки Петри (диаметром
140 мм) или по поверхностям трех обычных чашек Петри (диаметром 90 мм). При использовании
только одного разбавления подготавливают дубликаты, используя две большие чашки или шесть
малых.
С помощью шпателя, изготовленного из стекла, пластмассы или стали (например, изготовлен
ной из стекла палочки, изогнутой в форме хоккейной клюшки диаметром приблизительно 3,5 мм и
длиной 20 см. изгибы выполнены под прямым углом на расстоянии 3 см от одного конца палочки
и сплющены на концах с помощью нагревания), распределяют посевной материал, по
возможности, быстро и равномерно по поверхности агара, не касаясь боковых стенок чашки Петри.
Закрыв чашку крышкой, дают посевному материалу абсорбироваться в течение 15 мин при комнатной
температуре.
В определенных случаях (как указано в соответствующем стандарте) посевной материал можно
поместить на мембрану и потом распределить по среде, как описано выше.
10.2.4.3 Метод спирального нанесения материала
10.2.4.3.1 Общие положения
Метод спирального нанесения посевного материала для определения уровня содержания
микроорганизмов проверен в межлабораторных испытаниях молока и молочных продуктов и других
пищевых продуктов.
Используемое оборудование — спиральный дозатор — описан в 5.24.
10.2.4.3.2 Приготовление чашек с агаровой средой
Для приготовления чашек с агаровой средой рекомендуется использовать автоматический до
затор со стерильной системой дозирования, чтобы получить чашки с одинаковым объемом агаровой
среды, с целью гарантии, что слои агара ровные, не содержат пузырьков воздуха и стерильные.
Во все чашки наливают одинаковое количество агара таким образом, чтобы под дозирующей
иглой спирального дозатора высота слоя агара была одинаковой во всех чашках, и чтобы угол кон
такта оставался правильным и одинаковым.
Перед использованием чашки высушивают (см. ISO 11133), чтобы на поверхности среды не
осталось капель воды.
10.2.4.3.3 Процедура нанесения посевного материала и подсчет
Обеззараживают кончик дозирующей иглы и трубку, обмакнув их в растворе гипохлорита
натрия (см. 5.24.4). а затем в стерильную воду через систему, перед тем как втянуть в дозирующую
иглу жидкий образец. В качестве альтернативы используют одноразовый микрошприц, если это
предусмотрено в оборудовании.
Помещают предварительно разлитую агаровую среду в чашке Петри на поворотный столик и
опускают дозирующую иглу. Проба неравномерно распределяется по среде по мере движения кончи ка
иглы по поверхности агаровой среды. Засеянную чашку убирают, а дозирующую иглу возвращают в
исходное положение. Иглу обеззараживают или заменяют микрошприц и загружают для посева в
другие чашки.
Закрыв чашку крышкой, дают посевному материалу абсорбироваться в течение 15 мин при
комнатной температуре, после чего проводят термостатирование (см. 10.2.5).
После термостатирования на поверхность засеянной агаровой среды в центр чашки помещают
специальную сетку для подсчета количества микроорганизмов в чашках, засеянных по спирали. Для
определения количества микроорганизмов используют «правило двадцати». Подсчет колоний начи
нают. выбрав клин и начав подсчет от наружного края первого сегмента по направлению к центру, пока
не подсчитают 20 колоний. Процедуру завершают подсчетом в сегменте, содержащем двадца-
31