ГОСТ ISO 7218—2015
12 Метод идентификации (подтверждения)
12.1 Общие положения
Для биохимического и серологического подтверждения используют только чистые культуры.
Стандартные методы подтверждения описаны в соответствующих нормативных документах. В
качестве альтернативы биохимическим методам, приведенным в этих стандартах, методы
подтверждения, указанные в данном разделе (биохимические наборы, нуклеиновые пробы), следует
использовать в условиях, указанных также в данном разделе, если они особо не оговорены в
соответствующих стандартах.
12.2 Приготовление чистой культуры
Приготовление чистых культур начинают с выделения одной колонии в агаровой среде. Затем
выделенную колонию пересевают на иеселективную агаровую среду. После инкубации в термостате
выделяют хорошо изолированную колонию для последующих подтверждающих испытаний. При
необходимости посев колонии повторяют.
Желательно выполнять идентификацию, используя клетки одной колонии. Если в одной
колонии недостаточного количества клеточного материала, материал вначале рекомендуется
посеять в жидкую среду или на косой агар (косяк), после чего можно использовать субкультуру для
выполнения испытаний.
12.3 Окрашивание по Граму (модифицированный метод Хакера)
12.3.1 Общие положения
Данный способ окрашивания бактериальных клеток позволяет описать морфологию бактерий и
разделить их на две группы по тому, способны они или нет сохранять цвет кристаллического фиоле
тового (грамположительные Грам+) в условиях исследования. Результаты такого деления, главным
образом, вытекают из различий в структуре клеточных стенок двух групп, что коррелирует с другими
основными различиями между двумя группами.
Удовлетворительной альтернативой окрашивания по Граму является использование 3 %-ного
раствора гидроокиси калия (КОН). Полную петлю выросшей культуры бактерий перемешивают в
двух каплях раствора КОН. Грамотрицательные (Грам-) бактерии станут причиной увеличения вязко
сти и слизистости раствора в течение 30 с, так что смесь тянется за бактериологической петлей при
поднятии петли.
Существует несколько приемов выполнения окрашивания по Граму. но все они соответствуют
последовательности, приведенной 12.3.2.
12.3.2 Растворы
12.3.2.1 Общие положения
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые растворы.
В таком случае следуют рекомендациям изготовителя.
12.3.2.2 Раствор кристаллического фиолетового
12.3.2.2.1 Состав:
кристаллический фиолетовый — 2.0 г;
этиловый спирт (95 %) — 20 см3;
оксалат аммония (C2HsN204) — 0,8 п
вода — 80 см3.
12.3.2.2.2 Приготовление
Растворяют кристаллический фиолетовый в этиловом спирте, а оксалат аммония в дистилли
рованной воде. Смешивают эти два раствора и оставляют смесь на 24 ч до использования.
12.3.2.3 Раствор йода
12.3.2.3.1 Состав:
йод — 1.0 г,
йодистый калий (KI) — 2,0 г,
вода —100 см3.
12.3.2.3.2 Приготовление
Йодистый калий растворяют в 10 см3воды и добавляют крапинки йода. После растворения до
водят до 100 см3в мерной колбе.
45