ГОСТ ISO 7218—2015
Чтобы определить, происходит ли рост искомых микроорганизмов, можно использовать раз
личные критерии, например, визуальное обследование помутнения, выделение газа, изменение цве та,
последующее выделение микроорганизмов на селективной агаризованной среде в определенных
условиях температуры и атмосферы инкубирования. Состав питательной среды и критерии для вы
явления различий положительного и отрицательного результата определены в соответствующих
стандартах.
Используя подобный подход, каждый образец для анализа может быть описан только каче
ственно. значение, т.е. результат оценивается как положительный или отрицательный. Чтобы устано
вить количество присутствующих микроорганизмов, необходимо исследовать несколько проб для
анализа, начальных суспензий и разведений и использовать статистические методы для определения
наиболее вероятного числа (НВЧ).
10.5.2 Посев
10.5.2.1 Общие положения
Если используют селективную питательную среду, добавление образца для анализа не должно
уменьшать селективных свойств этой среды, тем самым способствуя росту прочих микроорганизмов. В
большинстве стандартов информация о совместимости определенных образцов и жидкой среды
описана в области их применения. Необходимо с осторожностью подходить к таким образцам, как
специи, какао, бульон и т.д., поскольку они могут содержать подавляющие рост микроорганизмов ве
щества. в связи с чем требуют добавления нейтрализующих веществ, применения более высоких ко
эффициентов разведения, центрифугирования, фильтрования или иммуномагнитной сепарации для
выделения искомых микроорганизмов из образца, даже если это специально не оговорено в соответ
ствующих стандартах. Несовместимость может также быть вызвана биологическим составом образ
ца: сильно загрязненные от окружающей среды пробы, ферментированные продукты или продукты,
содержащие пробиотики, очевидно представляют большие проблемы микробиологу-аналитику. чем
пробы, которые содержат очень незначительное количество микроорганизмов. Для таких проблемных
образцов рекомендуется выполнять эксперименты, используя контрольные микроорганизмы, чтобы
подтвердить, что метод действительно подходит для анализа данного образца.
При использовании метода НВЧ при анализе твердых проб, в том числе порошкообразных, для
подготовки исходной суспензии отбирают только одну пробу. Для анализа данной исходной суспензии
используют аликвоты.
10.5.2.2 Проведение анализа
Если в соответствующих стандартах нет иных указаний, объемы образцов для анализа, равные
или меньше 1 см1, обычно добавляют к объему сред обычной концентрации, в 5 — 10 раз превыша
ющему объем пробы для анализа. Пробы для анализа объемом от 1 см1до 100 см3обычно добавля
ют к равным объемам сред двойной концентрации.
Для объемов, превышающих 100 см3, допускается использовать более концентрированные
среды. Для особых целей стерильную обезвоженную среду можно растворить в холодном (или пред
варительно нагретом до 30 °С) образце, подлежащем анализу.
Если нет иных указаний, время, прошедшее с момента приготовления первого разведения про
бы и момента засева последней пробирки, многолуночного планшета или флакона, должно состав
лять менее 30 мин.
10.5.3 Выбор способа посева
Сущность метода наиболее вероятного числа заключается в разбавлении пробы до такой сте
пени, чтобы посевной материал не всегда содержал живые микроорганизмы. По «выходу», т. е. по
количеству посевного материала, дающему рост в каждом разведении, будет оцениваться начальная
концентрация бактерий в пробе. Чтобы получить оценку в широком диапазоне возможных концентра
ций. микробиологи используют серийные разведения, инкубируя в термостате по несколько пробирок
(или чашек и пр.) каждого разведения. НВЧ микроорганизмов, присутствующих на уровне исходной
пробы, и точность оценки можно рассчитать с помощью статистических методов на основе числа по
ложительных и отрицательных пробирок, полученных после инкубации в термостате.
Осуществляют выбор НВЧ из различных существующих конфигураций в соответствии:
- с ожидаемым числом микроорганизмов в анализируемой пробе.
- требованиями регламентов.
- требуемой точностью и
- другими практическими соображениями.
Неопределенность измерения зависит от числа положительных образцов для анализа, наблю
даемых практически одинаковым образом, поскольку неопределенность подсчета колоний зависит от
числа колоний в чашке. Неопределенность измерения изменятся как функция корня квадратного из
числа использованных пробирок, поскольку точность возрастает вместе с увеличением числа повтор ных
испытаний. Число пробирок необходимо увеличить в четыре раза для того, чтобы неопределен-
39