ГОСТ ISO 7218—2015
Если количество бактерий очень мало (менее 10 колоний в или на чашке при минимальном
разбавлении), рекомендуется проводить подсчет с использованием жидких сред (например, НВЧ). С
целью повышения статистической надежности результатов (см. приложения В и С) также могут быть
использованы концентрирование посредством фильтрования, иммуноселарации или центрифугиро
вания.
10.2 Подсчет при использовании плотных питательных сред
10.2.1 Общие положения
Чашка Петри должна быть маркирована этикеткой, на которой указывают номер пробы, разве
дение, дату посева и другую необходимую информацию.
Необходимо выбрать определенные разведения, чтобы обеспечить получение определенного
количества колоний на чашках (см. 10.3.1) и исключить возможные ингибирующие свойства.
Для переноса каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку, кроме случаев,
когда работу ведут от самого высокого разведения к самым низким разведениям.
П р и м е ч а н и е — Данный подпункт приводится для общего случая разведения 10’, но также допу
стимыдругие виды разведения (например. 1:5или 1:2).
10.2.2 Количество чашек Петри на каждое разведение
В процедуре подсчета в микробиологии пищевых продуктов обычно используют одну чашку на
каждое разведение микроорганизмов с проведением не менее двух последовательных разведений. С
целью повышения надежности можно также использовать две чашки на одно разведение.
Если используют только одно разведение, то с целью повышения надежности результатов
можно использовать две чашки сданным разведением согласно приложению D.
В лабораториях, которые не применяют принципы обеспечения качества, с целью повышения
надежности результатов можно использовать две чашки с одним разведением согласно приложению D.
10.2.3 Методы разливки чашек
Отбирают определенные объемы разведений для исследования, касаясь наконечником пипетки
боковой стенки пробирки, чтобы удалить избыточную жидкость с внешней стороны пипетки. Припод
нимают крышку стерильной чашки Петри так. чтобы была возможность внесения содержимого пипет ки
в чашку, после чего содержимое распределяют.
После переноса расплавленной агаровой среды из водяной бани, отирают сухой флакон чи
стым полотенцем во избежание загрязнения чашек водой. Избегают циркуляции среды на внешней
стороне контейнера или на внутренней стороне чашки в процессе ее наполнения. С целью исключить
загрязнения среды флакон держат практически горизонтально. Также следует избегать опускание
флакона в период между наполнениями. Выливают агаровую среду при температуре 44 СС — 47 СС в
каждую чашку Петри (как правило. 18 — 20 см3 агара в чашку Петри диаметром 90 мм. или
45 — 50 см3агара в чашку Петри диаметром 140 мм для того, чтобы слой среды составлял не менее
3 мм) в течение 15 мин инокуляции (чтобы исключить агрегирование колоний). Необходимо наливать
расплавленную среду таким образом, чтобы избежать ее попадания непосредственно в инокулят (по
севной материал). Расплавленную среду и инокулят немедленно тщательно перемешивают для по
лучения равномерного распределения микроорганизмов в питательной среде, например, посред
ством плавных движений чашки взад-вперед, из стороны в сторону и круговых движений. Далее чаш
ки помещают на холодную горизонтальную поверхность, чтобы дать время охладиться и затвердеть
питательной среде (время затвердевания агара не должно превышать 10 мин).
Если в исследуемом продукте предполагается присутствие колоний (например, вида Proteus) с
«ползучим» ростом, используют для исследования слой со стерильным «голодным» агаром или
идентичной питательной средой, наносимые на затвердевший агар в чашки с посеянным материалом
(как правило. 5 см3агара в чашке Петри на 90 см3), чтобы предотвратить или свести к минимуму рас
пространение такого «ползучего» роста.
10.2.4 Поверхностный посев
10.2.4.1 Общие положения
Методы посева, предназначенные для получения только поверхностных колоний на агаровых
чашках, имеют некоторые преимущества по сравнению с методом заливки в чашки для выращивания
микроорганизмов внутри агара. Морфологию поверхностных колоний легко наблюдать, используя
способности оператора различать различные виды колоний. Микроорганизмы не подвергаются дей
ствию высокой температуры расплавленной агаровой среды, поэтому количество колоний может
быть выше.
30