ГОСТ ISO 10993-4-2011
определения концентрации свободного гемоглобина плазмы как индикатора
гемолиза, в настоящее время применяют около 20 методов, но ни один из них не
распространен широко. Все методы могут быть разделены на две большие группы:
1 Использующие регистрацию поглощения непосредственно оксигемоглобина
(при 415, 541 и 577 нм) и его производных;
2 Использующие регистрацию поглощения производных гемоглобина,
полученных путем химических превращений (гемоглобин реагирует с бензидин-
подобными хромогенами и перекисью водорода, или из него формируют
циангемоглобин) (72).
Анализы всех видов могут быть выполнены как в ручном режиме, так и
автоматически.
Популярный метод измерения концентрации гемоглобина основан на его
катализирующем эффекте при окислении производных бензидина. например,
окислении тетраметилбензидина преркисью водорода. Скорость образования
окрашенного продукта(определяетсяфотометрическипри 600нм) прямо
пропорциональна концентрации гемоглобина. К преимуществам этого метода можно
отнестипростотуавтоматизацииспривлечениемкоммерческидоступной
аппаратуры, отсутствие высокотоксичных и экологически опасных реагентов или
отходов (синильная кислота и ее производные), доступность стандартных образцов
гемоглобина, откалиброванных против стандартных образцов HiCN. Нижний предел
чувствительности метода (5 мг/л) сравним с таковым для гемоглобинцианидного
метода (70). Основным недостатком этого метода является использование
потенциально опасных для здоровья производных бензидина, а также высокие
расходынаутилизациюреагентовипродуктов.Болеетого,диапазон
регистрируемых концентраций недостаточно широк (от 5 до 50 мг/л) (73), и в
исследуемом образце может присутствовать ряд агентов, способных ингибировать
(до 40 %) (74) реакцию окисления под действием перекиси: антикоагулянты,
комплексообразующие с кальцием (цитраты, оксалаты. ЭДТА) (73), альбумин (75)
или другие неспецифические компоненты плазмы (74).
Таким образом, прямые оптические методы, такие как методы Harboe (76),
Cripps (77) или Taulier (78) с сравнимой чувствительностью и воспроизводимостью,
могут быть заменены. Однако, как уже было отмечено выше, химические
превращения гемоглобина и вызванные ими изменения его спектра могут искажать
результаты в пробах на определение гемоглобина. Более того, необходимо вводить
43