ГОСТ ISO 16140—2011
Приложение Р
(обязательное)
Продел обнаружения и предел количественного определения числа микроорганизмов
Р.1 Предел обнаружения
Обычно при наличии неопределенности метода, связанной, например, с используемым образцом, наблюде
ние только одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на среде не достаточно для предположения о присутствии
аналита. На таком низком уровне для качественных методов необходим дихотомический подход к событию, т. е.
выявление присутствия (1 и более КОЕ) иотсутствия (нет КОЕ). Таким образом, процесс подчиняется закону Пуас
сона (низкие или высокие значения) или биномиальному закону (промежуточные значения) с частотой присутствия
пр.
Учитывая, что теоретический отрицательный контрольный образец не дает результата о присутствии ана
лита. предел обнаружения для низкой контаминации (пуассоновский) достигается минимум по
пр
присутствиям,
соответствующим порогам принятия решения
LC =
3 (при 1 -
и
= 95 %) или 5 (при 99 %). Пределы обнаружения
также получают, включая статистическую ошибку 2-го типа р. например
LOD
= 7 при односторонней
а
= 5 % и 1 -
р> 90 %.
Пуассоновский закон дает минимальное число
пр
положительных результатов из п (пропорционально р) для
достижения значимо положительного утверждения на уровне доверительной вероятности 1- а (см. таблицу Р.1).
Таблица Р.1 — Минимальное число
пр
положительных результатов из л
п
пр, если 1 -
а
* 0.95
пр.
если 1- и= 0,99
1
1
1
2
2
2
3
2
3
4
3
3
От 5 до 15
3
4
16 и больше
3
5
Однако не исчезает другой тип ошибки: недостаточная статистическая мощность, если размер выборки
п
слишком мал. Например, отсутствие положительных при
п = 2
образцах означает, что вероятность контаминации
меньше 78 % (с 95 % доверительной вероятности). Один положительный издвух соответствует вероятности кон
таминации 2.5 % или более с той же доверительной вероятностью. Можно видеть, что для достижения значимо
положительного утверждения при уровнях доверительной вероятности 95 % или 99 % минимальная вероятность р
контаминации уменьшается с увеличением
п. р
2
3/п
и соответственно 5/л (точнее 2.996/л и 4,605/п). Из этого в
основном следует, что если нужно получить вероятность контаминации р =10 % (при 95 %), то необходимо взять
более 30 образцов, (л г 3/р). Минимальный уровеньр. таким образом, является показательным.
Р.2 Предел определения
Применение правила Ассоциации АОАС к общему числу микроорганизмов позволяет получить значение
LOG
г 100. В данном стандарте априори используется Пуассоновское распределение со значениями s(n) =
Jn
и
CV(n)
=
s(n)/n
=
v jn <, Ю %.
чтодает л г 100.
Р.З Объем образца
До сих пор объем образца не учитывался. При разделении образца на множество подобразцов и исполь
зовании всех их для определения наличия контаминации необходимо обнаружение по меньшей мере трех (или
пяти) КОЕ во всем образце. Следовательно, вышеуказанные пределы (ложно представить в виде числа КОЕ для
данного подобразца. Повторять выборобразца, пока не получатся по меньшей мере три колонии для определения
окончательной оценки объема.
В общем, полученный минимальный объем нужен для микробиологического определения: его также можно
получить путем разбавления. Таким образом, теоретический предел
L
КОЕ на среде при разбавлении, в конце
концов, корректируется умножением на коэффициент разбавления
к.
т. е. получается
kL.
Например.
L
= 7 КОЕ/мг во
взвеси с разбавлением 1 к 10 твердого образца соответствовал бы пределу
L
= 70 КОЕ/мг в твердом образце.
48