ГОСТ РИСО 16140—2008
Приложение Р
(обязательное)
Предел обнаружения и предел количественного определения
числа микроорганизмов
Р.1 Предел обнаружения
Обычно при наличии неопределенности метода, связанной, например, с используемым образцом, наблю
дение только одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на среде не достаточно для предположения о
присут
ствии
аналита. На таком низком уровне для качественных методов необходим дихотомический подход к собы тию. т.
е. выявление
присутствия
(1 и более КОЕ) и
отсутствия
(нет КОЕ). Таким образом, процесс подчиняет ся закону
Пуассона (низкие или высокие значения) или биномиальному закону (промежуточные значения) с частотой
присутствия пр.
Учитывая, что теоретический отрицательный контрольный образец не дает результата о
присутствии
аналита. предел обнаружения для низкой контаминации (пуассоновский) достигается минимум по
пр присут
ствиям.
соответствующим порогам принятия решения
L C = 3
(при 1 - а
=
95
% )
или 5 (при 99
% ).
Пределы
обнаружения также получают, включая статистическую ошибку 2-го типа |i. например.
LOD
= 7 при односторон ней а
= 5 % и 1- 6 > 90 %.
Пуассоновский закон дает минимальное число
пр
положительных результатов из
п
(пропорционально р)
для достижения значимо положительного утверждения на уровне доверительной вероятнее™ 1 — а (см. таблицу Р.1).
Т а б л и ц а Р.1 — Минимальное число
пр
положительных результатов из
п
п
пр.
если 1- « = 0.95
пр.
если 1- а * 0.99
1
1
1
2
2
2
3
2
3
4
3
3
От 5 до 15
3
4
16 и больше
3
5
Однако не исчезает другой тип ошибки: недостаточная статистическая мощность, если размер выборки
п
слишком мал. Например, отсутствие
положительных при п = 2 образцах
означает, что вероятность контамина ции
меньше 78 % (с 95 % доверительной вероятности). Один положительный из двух соответствует вероятности
контаминации 2.5 % или более, с той же доверительной вероятностью. Можно видеть, что для достижения
значимо
положительного
утверждения при уровнях доверительной вероятности 95 % или 99 % минималь ная
вероятность р контаминации уменьшается с увеличением л: р 2 3/л и. соответственно.
Sin
(точнее 2.996/л и 4.606’л).
Из этого, в основном, следует, что если нужно получить вероятность контаминации р = 10 % (при 95 %), то
необходимо взять более 30 образцов, (л 2 3/р). Минимальный уровень о. таким образом, является показатель ным.
Р.2 Предел определения
Применение правила Ассоциации АОАС к общему числу микроорганизмов
позволяет получить
значение
LOG
г 100... В данном стандарте
априори
используется Пуассоновское распределение со значениями s(n)
=-ifn
и CV(n) = s(r?yn = 1/ t/л"
<,
10 %. что дает л
2
100.
Р.З Объем образца
До сих пор объем образца не учитывался. При разделении образца на множество подобразцов и использо
вании всех их для определения наличия контаминации необходимо обнаружение, по меньшей мере, трех (или
пяти) КОЕ во всем образце. Следовательно, вышеуказанные пределы можно представить в виде числа КОЕ для
данного подобразца. Повторять выбор образца, пока не получатся, по меньшей мере, три колонии для
определе ния окончательной оценки объема.
В общем, полученный минимальный объем нужен для микробиологического определения; его также мож
но получить путем разбавления. Таким образом, теоретический предел
L
КОЕ на среде при разбавлении, в конце
концов, корректируется умножением на коэффициент разбавления
к,
т. е. получается
kL.
Например.
L
= 7 КОЕ/мг
во взвеси с разбавлением 1 к 10 твердого образца соответствовал бы пределу
L
=
70 КОЕ/мг в твердом образце.
50