ГОСТ РИСО 16140—2008
Часто, когда невозможно измерить или обнаружить величину ниже данного нижнего уровня, выби
рают образцы с концентрацией микроорганизмов, близкой к первой оценке xLC. взятой из предыдущей пря
мой линии для проверки градуировки:
xtc »1,645sa.
где sa определено в приложении R. В окрестности такой концентрации оценивают среднеквадратическое
отклонение, ожидаемое значение которого близко кs0и которое используется вместо него.Другая процедура
предусматривает использование среднего значения и среднеквадратического отклонения всех данных
измерений самых низкихдоз. обнаруженных после реплицирования разведений по одной и той же схеме
(коэффициент разведения от 1:2до меньше либо равно 1:10).
П р и м е ч а н и е — Оценка среднеквадратического отклонения &эвключает в себя много неопределенно
стей. в основном связанных с диапазоном ниже нижнего уровня разведения. Таким образом, исходная оценка s
(проводимая, по возможности, устойчивым методом Sn. приведенным в приложении Q) часто является достаточ
ной для получения дополнительных оценок.
6 2.2.2 Термины и определения
6.2.2.2.1критический уровень [LC) (critical level): Наименьшее (ненулевое) количество, которое
можно обнаружить, нодля которого нельзя получить точное количественное значение. Ниже этого уровня
нельзя быть уверенным, что истинное значение не равно нулю.
П р и м е ч а н и е — На этом уровне вероятность |i ложноотрицательных результатов равна 50 % (p-ста
тистическая ошибка второго типа. см. 6 2.2.4).
6.2.22.2 предел обнаружения (LOD) (detection limit): Больше, чем критический уровень (6.2.2.2.1),
поскольку он включает в себя показатель, т. е. доверительную вероятность 1 - р, который должен быть
намного выше 50 %, например. 95 %.
Например. LOD =■среднее значение (холостое) ♦ zs0(холостое), где z = 2 1.645 * 3,3 есть гауссов
ское критическое значение при а = р = 0.05 (односторонний доверительный интервал, см. 6.2.2.4), для
достаточно большого числа п холостых образцов.
6.2.2.2.3 предел количественного определения (LOQ) (quantification limit): Наименьшее количе
ство аналита (т. е. наименьшее реальное число организмов), которое можно измерить и количественно
оценить с заданной прецизионностью и точностью в экспериментальных условиях метода, подлежащего
валидации.
q
П р и м е ч а н и е — Ассоциация химиков-аналитиков. состоящих на государственной службе (АОАС).
определяет предел количественного определения для количественных методов как LOQ = 10 S . Э
то
равноцен но
утверждению, что коэффициент изменчивости CV, = s, lx должен быть ниже 10 %. см. [2].
6.2.2.3 Протокол измерений и образцы
Для оценки базового или порогового разброса s0 проводят, по меньшей мере, шесть (лучше 10)
определений холостых образцов (отрицательных, с нулевойдозой или дозой, близкой к нулю).
Пр и ме ч а н и е — При подсчете числа организмов достаточно болев пяти образцов на минимальном, не
равном нулю, уровне, для того чтобы удостовериться, что степень контаминации составляет р < 50 %, когда не
обнаруживается положительных образцов (доверительный уровень 95 %). Если обнаруживается один положи
тельный образец из пяти, то можно считать, что р > 1 %. Таким образом, если начать с трех доз аналита
стандартного материала, выбранных из 3. 10. 30. 100. 300 и г д. КОЕ/единица. и реплицируя каждый из них
минимум шесть раз, можно оценить критический уровень (50 %-ное обнаружение): например, в идеальном
случае может быть следующее: 0/6 при 10. 2/6 при 30. 5/6 при 100, что дает оценку, близкую к30 КОЕ /единица. Тем не
менее, оценку, которую дает эта процедура, можно использовать. (Данные о когерентном оценивании см. в
приложении Р).
6.2.2.4 Вычисления
Вобщем случае, критический уровень и предел обнаружения включают статистические ошибки двух
типов: а ((соответствует определению несуществующей разницы {ложноположительный результат)] и р
[соответствует иеобнаружению истинной разницы (ложноотрицательный результат)].
Показатель 1 - р является вероятностью достоверного определения значения, превышаю
щего LC.
16