ГОСТ Р ИСО 11737-1—2022
В.6 Перечисление (подсчет колоний)
В.6.1 В методике перечисления подсчета колоний, использующей подсчет колоний, должны быть установле
ны процедуры для решения различных задач, таких как:
a) обнаружение небольших колоний (например, с помощью стереомикроскопа);
b
) подсчет и отчетность о необычных колониях (например, ползущий рост);
c) подсчет и отчетность о переполненных чашках [например, затемненные колонии или слишком многочис
ленное количество для проведения подсчета (TNTC) чашки] и
d) подсчет результатов серийных разведений.
В.
6
.2 В методике подсчета, использующей подсчет колоний, следует учитывать количество колоний, вырос
ших на чашках. Это число должно быть таким, чтобы каждый жизнеспособный микроорганизм мог выражать себя
как видимая колония, не подвергаясь негативному воздействию со стороны других микроорганизмов, граничащих
с ними.
В.6.3 Стандартная практика подсчета чашек обычно устанавливает нижний предел для количества коло
ний на чашке. Этот предел основан на наличии нескольких разведений, из которых можно произвести выборку.
Необязательно применять многократные разведения для определения биологической нагрузки для медицинского
продукта, в котором биологическая нагрузка низкая.
В.6.4 При подсчете чашек следует оценивать различия в результатах в зависимости от технического пер
сонала. Для примера ссылки на допустимые различия между техническими специалистами — см. «Стандартные
методы. 9215 Подсчет гетеротрофных пластин».
В.
6
.5 Наличие волокон может препятствовать образованию дискретных колоний и тем самым затруднять их
подсчет.
В.
6 . 6
Использование слоя агара, вылитого и распределенного на поверхности исследуемой чашки, может
показать тот результат испытания, который легче пересчитать после инкубации, если присутствуют ползущие ми
кроорганизмы.
В.
6
.7 Для автоматизированных методов подсчета валидацию системы следует выполнять в соответствии с
ИСО/МЭК 17025.
В.
6 . 8
Если использовано несколько условий испытания (например, подсчет аэробных бактерий с одной чаш
ки и подсчет грибов с другой чашки) и колонии не восстанавливаются, то значения LOD являются кумулятивными.
Например, если количество аэробов <2 КОЕ и грибов <2 КОЕ, то общее количество составляет <4 КОЕ.
В.7 Другие методы обнаружения микроорганизмов
Методы, отличные от подсчета колоний, могут быть использованы для определения биологической нагрузки.
К ним относят измерения метаболической активности (например, импедиометрия или эпифлуоресценция). Такие
методы называются косвенными, потому что для того, чтобы получить значение относительно количества жизне
способных микроорганизмов, как это было определено ранее, они должны быть откалиброваны по количеству
ко лоний. Альтернативные методы должны обладать достаточной чувствительностью для обнаружения низких
уров ней микроорганизмов. Как правило, нижний предел обнаруженных чисел превышает 100 КОЕ.
П р и м е ч а н и е — Некоторые быстрые микробиологические методы (например, биолюминесценция, фер
ментативная цитометрия) могут предоставить подробную информацию о диапазоне и относительном количестве
микроорганизмов, присутствующих биологической нагрузке, и позволяют оценить возможную изменчивость. Они
также могут предоставлять информацию об биологической нагрузке быстрее, чем прямое культивирование.
В.8 Скрининг на высвобождение веществ, влияющих на определение биологической нагрузки
В.8.1 Скрининг направлен на изучение влияния на жизнеспособность потенциально уязвимых микроорга
низмов веществ, которые могут выделяться из изделия в суспендирующую жидкость. Этот пример может быть
использован для оценки метода в соответствии с
6
.
1
.
2
.
В.
8
.2 После отбора изделий каждый из них должен быть подвергнут методике извлечения микроорганизмов,
которая в дальнейшем будет использована на регулярной основе. Если при методе извлечения применен элюент, то
могут руководствоваться требованиями В.8.3; если изделие вводят непосредственно в среду, то требования В.
8
.4
могут быть более предпочтительными.
В.8.3 Элюент не должен подавлять рост микроорганизмов, извлеченных из изделия.
В.8.4 Если изделие должно быть введено непосредственно в питательную среду (например, как при оценке
НВЧ; см. В.3.3), то можно использовать исследование на пригодность метода, описанного в фармакопеях. В этом
исследовании изделие вводят в среду вместе с небольшим количеством микроорганизмов и инкубируют в тех же
условиях, что и для обычного определения бионагрузки. Количество используемых микроорганизмов должно
быть примерно от 50 до 100 (см. В.
8
.5 для оценки результатов). Через определенный период среду исследуют на
види мый рост.
Если медицинская продукция содержит антимикробное вещество, которое может медленно высвобождаться
в среду, то в конце инкубационного периода целесообразно подвергнуть испытанию сочетания промежуточного из
делия с низким количеством микроорганизмов.
27