ГОСТ Р ИСО 11737-1—2022
В.2 Методы, в которых использовано извлечение микроорганизмов элюированием
В.2.1 Общие положения
В.2.1.1 Несколько методов, представленных в настоящем приложении, могут быть объединены для увели
чения числа обнаруженных микроорганизмов и уменьшения изменчивости.
В.2.1.2 Степень адгезии микроорганизмов к поверхностям зависит от характера поверхности, включенных
микроорганизмов и других присутствующих материалов (например, смазочных материалов). Происхождение кон
таминации также будет влиять на степень адгезии. Чтобы извлечь микроорганизмы, используемые процедуры
могут состоять из промывки с применением физической силы или прямого отбора проб данной поверхности. По
верхностно-активное вещество может быть использовано для повышения извлечения, но следует признать, что
поверхностно-активные вещества в высоких концентрациях могут оказывать ингибирующее действие.
В.2.1.3 Для материалов, контактирующих с нестерильными жидкостями, микроорганизмы могут возникать в
виде биопленки, если не будут приняты соответствующие меры контроля биологической нагрузки. Биопленка —
это структура, в которой микроорганизмы инкапсулированы в матрицу, прочно прилегающую к поверхности. Микро
организмы в биопленках могут проявлять повышенную устойчивость к процессам стерилизации. Биопленки могут
появляться и быстро развиваться в большей степени на медицинских продуктах, содержащих ткани, или на ис
пользуемых изделиях. В таких случаях следует учитывать потенциал образования биопленки и не следует предпо
лагать, что методы обработки, перечисленные в В.2.2, будут пригодны для полного освобождения
микроорганиз мов от биопленки. Указание на наличие биопленки может быть получено во время валидации
метода удаления, если при повторном восстановлении регистрируется повторное высокое количество микробов.
Высокий уровень эндотоксина также может быть признаком присутствия биопленки.
В.2.1.4 Любая обработка, используемая при определении биологической нагрузки, должна быть воспроиз
водимой, и, кроме того, следует избегать тех условий, которые могут повлиять на жизнеспособность микроорганиз
мов, таких как чрезмерная кавитация, поперечные силы, повышение температуры или осмотический шок.
В.2.1.5 Некоторые методы обработки легче контролировать, чем другие. Переменные процесса обработки и
способы их контроля следует учитывать при выборе обработки и разработке подходящих условий обработки. На
пример, для данной обработки может быть увеличено время или характер механического перемешивания может
быть изменен, чтобы увеличить извлечение микроорганизмов.
В.2.1.6 Некоторые методы обработки могут дезагрегировать исследуемый продукт (например, дезинтегра
ция, обработка в стоматере отмыванием и вихревое перемешивание). Наличие дезагрегированного материала
может затруднить подсчет микроорганизмов. Возможна дополнительная обработка, например для отделения де
загрегированного материала от элюента. Следует проследить за тем, чтобы полученные подсчеты были репрезен
тативными. Некоторые виды микроорганизмов более склонны к агрегации/реагрегации, чем другие,
основанные главным образом на их относительной гидрофобности.
В.2.1.7 Необходимо как можно быстрее передать образцы для испытаний в лабораторию. Если задержка
в передаче неизбежна, то следует выбрать такие условия хранения, которые соответствуют установленным и ко
торые позволяют свести к минимуму изменения в микробной популяции. Следует указать максимальное
время хранения. Высушивание может быть причиной значительного снижения численности микроорганизмов и
должно быть учтено при выборе условий и сроков хранения.
В.2.2 Методы извлечения
В.2.2.1 Обработка в стоматере отмыванием
В.2.2.1.1 Испытуемый образец и указанный объем элюента помещают в стерильный пакет.
Возвратно-поступательные лопасти воздействуют на пакет, выталкивая элюент через образец и вокруг него.
В.2.2.1.2 Должно быть определено время обработки.
В.2.2.1.3 Этот метод особенно подходит для мягких, волокнистых и/или абсорбирующих материалов, но не
пригоден для любых материалов, которые могли бы проколоть пакет (например, устройства, содержащие иглы или
жесткие предметы).
В.2.2.1.4 Этот метод может дать суспензию с низкой концентрацией микроорганизмов, если используется
относительно большой объем элюента. Если это практически возможно, элюент следует отфильтровать.
В.2.2.2 Ультразвуковое исследование
В.2.2.2.1 Испытуемый предмет погружают в указанный объем элюента в подходящем сосуде. Либо сосуд
и его содержимое обрабатывают в ультразвуковой ванне, либо ультразвуковой зонд погружают в содержащийся
в нем элюент. Микроорганизмы также могут быть инактивированы ультразвуком, особенно с большей передачей
энергии, и инактивация более вероятна при использовании зонда, чем в ультразвуковой ванне. Оценку метода
ультразвукового испытания следует проводить в соответствии с В.9.
В.2.2.2.2 Следует определить номинальную частоту ультразвукового воздействия и продолжительность об
работки. Кроме того, должно(ы) быть определено(ы) положение(я), в котором(ых) предметы помещают в ультра
звуковую ванну. Следует рассмотреть вопрос об ограничении количества предметов, подлежащих одновременной
обработке, поскольку имеющаяся мощность ультразвука может быть уменьшена за счет экранирования.
В.2.2.2.3 Этот метод особенно подходит для твердых непроницаемых предметов и предметов сложной фор
мы. Он может быть разрушительным для некоторых медицинских продуктов, особенно тех, которые содержат элек
тронные компоненты, такие как имплантируемые генераторы импульсов.
22