ГОСТ Р ИСО 11737-1—2022
В.3.3.2 Метод заключается в отборе реплицированных проб продукта (по объему или весу), содержащих в
среднем одинаковое количество жизнеспособных микроорганизмов в каждой пробе/подпробе (требование ран-
домности распределения), и в индивидуальной оценке каждой выборки на предмет наличия жизнеспособных ми
кроорганизмов путем пересева на жидкие питательные среды и инкубации. Как правило, подходят такие же пита
тельные среды и условия, как и в ИСО 11737-2, в течение семи дней. Ряд разведений может быть инокулирован в
питательную среду таким образом, чтобы часть инокулированной среды не производила видимого роста при по
следующей инкубации. По частоте проявления положительных тестов в наборе повторений оценивают количество
жизнеспособных микроорганизмов, присутствующих в образце или массовом продукте, из которого взят образец;
95 %-ные доверительные пределы оценки относительно широки. Оценка и ее доверительные пределы получе ны
из опубликованных таблиц НВЧ [26], которые разработаны в предположении того, что число жизнеспособных
микроорганизмов, присутствующих в реплицированных образцах, распределено вокруг среднего числа в соответ
ствии с распределением Пуассона. FDA ВАМ, приложение 2 [27], включает электронную таблицу для расчета НВЧ с
доверительной вероятностью 95 %.
В.3.3.3 Ключевым требованием для применения метода НВЧ является рандомное распределение микроб
ной популяции по всему исследуемому продукту. Соответственно, метод НВЧ может быть необходим при опреде
лении биологической нагрузки для жидких медицинских продуктов, вязких жидкостей, порошков или в тех
ситуаци ях, когда биологическая нагрузка оценивается в жидкости, используемой в качестве элюента для одного
продукта.
В.3.3.4 Методы НВЧ доступны в исполнении, но статистическое обоснование метода делает его более под
ходящим для общей оценки популяции, а не для точного определения. Метод НВЧ для 10 образцов однократного
разведения показан в FDA ВАМ, таблица 5 [27]. Данный метод однократного разведения не предусматривает
выполнения дополнительных разведений, которые могут предоставить дополнительную информацию о количе
стве микроорганизмов на положительном образце. Для отдельных проб или ЧПИ в качестве альтернативы для
определения НВЧ может быть использована формула (В.1), которая является упрощенной версией оригинальной
формулы Кохрена [42]:
MPN(sd or SIP) =
ln (f) sjp.
где
sd
— однократное разведение;
In — натуральный логарифм;
п
— общее число образцов в испытании;
s — чисто образцов для отрицательного контроля роста.
В.3.3.5 Результаты НВЧ на продукте могут быть приравнены к результатам КОЕ на продукт для подсчета и
расчетов биологической нагрузки.
В.3.3.6 Если присутствуют микробоцидные или микробостатические вещества, то будут применены реше
ния, изложенные в В.8.
В.4 Перенос на питательную среду
В.4.1 Общие положения
В.4.1.1 Обработка, как правило, приводит к образованию суспензии микроорганизмов. Подсчет жизнеспо
собных микроорганизмов в суспензии можно провести с помощью одного из методов, описанных ниже.
В.4.1.2 Перед переносом на питательную среду может потребоваться дополнительная обработка, чтобы
разрушить агрегацию микроорганизмов и тем самым уменьшить недооценку. В некоторых случаях метод извлече
ния микроорганизмов из исследуемого образца также может разрушить такие агрегаты.
В.4.1.3 Наличие микробоцидных или микробостатических веществ будет влиять на выбор метода культиви
рования. Если в элюенте присутствуют микробоцидные или микробостатические вещества, их количество можно
уменьшить до неэффективной концентрации путем разбавления, удаления фильтрацией или химической инакти
вацией.
В.4.2 Мембранная фильтрация
В.4.2.1 Фильтрация элюента с последующей инкубацией фильтра на соответствующей питательной среде
для получения видимых колоний является эффективным средством подсчета жизнеспособных микроорганизмов.
Фильтр с соответствующим номинальным размером пор не более 0,45 мкм обычно достаточен для улавливания
микроорганизмов, однако следует рассмотреть возможность использования меньшего размера пор, если микро
организмы, присутствующие на/в продукте, гарантированно меньшего размера.
В.4.2.2 Как правило, требуется источник вакуума или в некоторых случаях источник давления. Следует со
блюдать осторожность во избежание чрезмерного противодавления, которое может привести к искажению или
повреждению мембранного фильтра.
В.4.2.3 Мембранная фильтрация элюентов, содержащих твердые частицы, такие как остатки волокнистых
продуктов, может быть затруднена, так как твердые частицы могут блокировать фильтр.
25