ГОСТ Р ИСО 11737-1—2022
А.8.2 Пределы обнаружения и подсчет на агаре
А.8.2.1 Пределы обнаружения
Пределы обнаружения (LOD) для методов испытания биологической нагрузки следует принимать во вни
мание при определении значения биологической нагрузки. Для микробиологической отчетности, когда часть экс
тракта исследуют на биологическую нагрузку и извлекают нулевые колонии, результаты обычно регистрируют как
менее чем «X», где «1/Х» является репрезентативным для фракции исследуемой части. Например, если изделие
экстрагируется в 400 мл и 1/4 экстракта фильтруется, результаты нулевых колоний будут регистрироваться как
менее 4 колониеобразующих единиц (т. е. < 4 КОЕ). Таким образом, LOD для этого примера равен 4. В микробио
логической отчетности результат < 4 КОЕ означает, что, возможно, весь экстракт содержит либо 0, 1, 2 или 3 КОЕ, но
правила микробиологической отчетности требуют, чтобы он был представлен как < 4 КОЕ.
Индивидуальные результаты биологической нагрузки представлены целыми числами, потому что это число
является репрезентативным для колониеобразующей единицы. Средние значения или другие математические вы
числения с использованием данных биологической нагрузки обычно приводят с точностью до одного десятичного
знака.
LOD может быть усовершенствован следующим образом:
a) изменение метода испытания (например, фильтрация большей части экстракта);
b
) объединение нескольких образцов;
c) использование другого метода тестирования, такого как НВЧ.
А.8.2.2 Подсчет на агаре
В стандартных микробиологических методах для других промышленных применений рекомендуется выби
рать чашки с агаром, содержащие приемлемые диапазоны (например, менее 200 КОЕ, от 25 до 250 КОЕ или от 30
до 300 КОЕ). Это применимо, когда выполняется несколько разбавлений, из которых можно выбрать. Однако
при испытании биологической нагрузки это не всегда так, потому что:
- многие продукты имеют низкую биологическую нагрузку, которая будет иметь количество на пластине ме
нее чем, например, 30 КОЕ;
- многократные разбавления не всегда необходимы, когда количество невелико.
Для этих ситуаций целесообразно регистрировать и использовать количество менее 30 КОЕ. Подсчет на
агаре можно проводить тремя различными способами:
a) прямой подсчет КОЕ;
b
) приблизительное количество;
c) отсчеты, выходящие за пределы счетных или расчетных диапазонов.
Посредством прямого подсчета в таблицу сводят все колонии непосредственно с помощью любого метода,
который облегчает точные подсчеты (электронный счетчик, маркировочные таблички и т. д.).
Предполагаемый подсчет может быть выполнен, когда колонии на части агара могут быть подсчитаны и ум
ножены на оставшиеся части агара.
Приблизительный подсчет — это один из способов получения подсчета при наличии распространяющихся
колоний. Этот метод обычно применяют, когда распространяющиеся колонии не вытесняют другие колонии (из-за
размера или непрозрачности).
Подсчеты, выходящие за пределы счетного или расчетного диапазона, могут быть полуколичественными,
если это значение может быть округлено на основе наличия различимых колоний. Однако, если это невозможно
сделать, следует установить результат предельно большого количества подсчетов (TNTC). Приемлемой практикой
является исключение результатов TNTC из среднего значения для группы выборок. Результаты TNTC должны быть
исследованы.
Когда используют дубликаты чашек с агаром, коэффициенты разбавления или аликвоты, количество чашек с
агаром должно быть соответствующим образом скорректировано, чтобы получить количество для одного продукта.
А.8.3 Микробиологическая характеристика
Если при микробиологической характеристике выделяют типы микроорганизмов, не входящие в состав нор
мальной биологической нагрузки, следует рассмотреть вопрос об оценке значимости присутствия этих изолятов.
А.8.4 Данные биологической нагрузки для определения степени обработки
Дополнительные указания отсутствуют.
А.8.5 Пики биологической нагрузки
Данные биологической нагрузки могут демонстрировать значение, которое существенно больше (обычно на
зываемые пики биологической нагрузки), чем другие значения в ряде полученных. Этот пик биологической нагрузки
может произойти в одной из двух следующих ситуаций:
a) это значение не является нормальной и последовательной частью распределения биологической
нагрузки;
b
) то значение может быть нормальной и последовательной частью распределения биологической нагрузки.
Можно определить, что скачок (пик) биологической нагрузки не является нормальной и последовательной
частью распределения биологической нагрузки, изучив производственную практику, микробиологические испыта
ния и обработку образцов. В данном разделе установлено, как определить и как действовать в данной ситуации.
18