ГОСТ Р ИСО 11737-1—2022
В.4.2.4 Для инкубации мембранный фильтр может быть помещен либо на поверхность агара, либо на аб
сорбирующую прокладку, насыщенную жидкой питательной средой. Колонии, образующиеся на поверхности мем
бранного фильтра, подсчитывают и выделяют для микробиологической характеристики.
В.4.2.5 Мембранная фильтрация особенно востребована для суспензий с низкими концентрациями микро
организмов.
В.4.2.6 Фильтрация также востребована, когда жидкий субстрат проверяют на предмет содержания микро-
боцидных или микробостатических веществ, так как микроорганизмы удаляются из элюента и могут быть промыты
на мембранном фильтре перед инкубацией. Некоторые типы мембран могут поглощать или выделять те вещества,
которые могут ингибировать рост микроорганизмов, поэтому необходимо использовать только мембранные филь
тры, пригодные для подсчета микроорганизмов. Мембранный фильтр и элюент должны быть совместимы.
ВАЗ Посев на чашки методом заливки (глубинным способом)
В.4.3.1 При использовании метода посева на чашки методом заливки отдельные аликвоты (определенное
количество данного разведения) суспензии смешивают с расплавленной агаровой средой при температуре при
близительно 45 °С; затем смеси дают затвердеть в чашке Петри. Чашки инкубируют и подсчитывают колонии.
ВАЗ.2 Посев на чашки методом заливки не отделяет микроорганизмы от элюента. Если микробоцидные или
микробостатические вещества присутствуют, будут применены решения, изложенные в В.8.
В.4.3.3 Количество элюента, которое может быть внесено в чашки, ограничено. Поэтому этот метод может не
иметь предпочтительной чувствительности для суспензий с низкими концентрациями микроорганизмов.
В.4.3.4 Необходимо поддерживать температуру агара как можно ниже, чтобы избежать повреждения микро
организмов, поскольку даже температура 45 °С может инактивировать некоторые микроорганизмы окружающей
среды. Таким образом, заливочное покрытие имеет ограничения по типам микроорганизмов, которые могут быть
обнаружены, хотя модификации с использованием карбоксиметилцеллюлозы в качестве регулятора могут быть
возможны в особых случаях.
В.4.4 Посев на поверхность чашек
В.4.4.1 При использовании метода посева на поверхность чашек аликвоту суспензии распределяют по по
верхности питательной среды с помощью распределяющего устройства.
В.4.4.2 Аликвота (определенное количество данного разведения) суспензии, которая распределена по по
верхности среды, должна быть поглощена таким образом, чтобы могли развиться отдельные колонии; потребность в
поглощении определяет объем аликвоты, который может быть обработан при использовании одной чашки.
В.4.4.3 Если присутствуют микробоцидные или микробостатические вещества, то будут применены реше
ния, изложенные в В.8.
В.4.4.4 Количество элюента, которое может быть нанесено на чашку с агаром, ограничено. Поэтому этот
метод может не иметь предпочтительной чувствительности для суспензий с низкими концентрациями микроорга
низмов.
В.4.5 Спиральный метод посева
В.4.5.1 В технике спирального посева на чашку используют автоматизированное оборудование, которое рас
пределяет аликвоту (суспензии) на поверхность твердой среды. Суспензия распределяется с уменьшающейся ско
ростью по спиральной дорожке от центра культуральной чашки к периферии. После соответствующей инкубации
подсчет жизнеспособных микроорганизмов в исходной суспензии осуществляют с использованием определенной
счетной сетки и метода подсчета, при котором основой для расчетов является общее количество чашек или сек
торов.
В.4.5.2 Установлено, что спиральный метод посева дает воспроизводимые результаты, наиболее приемле
мым образом коррелирующие с теми, которые применяют при использовании обычных методов последователь
ного разбавления и поверхностного растекания. Благодаря конструкции аппарата и использованию капиллярных
трубок и небольших объемов спиральное покрытие в первую очередь поддается инокуляции суспензиями,
которые распределены надлежащим образом, свободны от агрегатов материала и содержат высокую
концентрацию микро организмов.
В.4.5.3 Если присутствуют микробоцидные или микробостатические вещества, то будут применены реше
ния, изложенные в В.8.
В.5 Инкубация (питательные среды и условия инкубации)
В.5.1 Примеры некоторых питательных сред и условий инкубации приведены в таблице А.2. Этот перечень
не является исчерпывающим, и определение типа(ов) биологической нагрузки микроорганизмов, присутствующих
на продукте, в том числе молекулярным путем, может спровоцировать включение или исключение этих или многих
других сред для микробной культуры.
В.5.2 Следует отметить, что все методы неселективного культивирования анаэробов могут позволить также
выявить рост факультативных аэробных микроорганизмов. Однако спектр таких микроорганизмов может значи
тельно варьироваться при различных питательных средах и условиях инкубации.
26