ГОСТ ISO 7218—2011
12.3.2.3 Раствор йода
12.3.2.3.1 Состав:
йод —1,0 г;
йодистый калий (KI) — 2.0 г;
вода —100 см3.
12.3.2.3.2 Приготовление
Йодистый калий растворяют в 10 см3воды и добавляют крапинки йода. После растворения доводят
до 100 см3в мерной колбе.
12.3.2.4 Раствор сафранина
12.3.2.4.1 Состав:
сафранин — 0.25 г;
этиловый спирт (95 %) — 10 см3:
вода — 100 см3.
12.3.2.4.2 Приготовление
Растворяют сафранин в этиловом спирте, затем смешиваютс дистиллированной водой.
12.3.3
Техника окрашивания
После фиксации на предметном стекло бактериального мазка, приготовленного из 18 - 24-часовой
культуры или мутного бульона, заливают мазок раствором кристаллического фиолетового. Оставляют на 1
мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают в течение нескольких секунд водой.
Наносят на стекло раствор йода. Оставляют на 1 мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают водой в течение нескольких секунд.
Стекло в наклонном положении осторожно и непрерывно промывают этанолом (95 %) в течение не
более 30 с до прекращения вымывания фиолетового красителя.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают водойдля удаления этилового спирта. Наносят
на стекло раствор сафранина и оставляют на 10 с. Стекло под наклоном осторожно промывают водой.
Высушиваютстекло.
12.3.4
Оценка результатов
Окрашенный мазок просматривают под микроскопом, используя для этого светосильный объектив
с масляной иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, относят
к грамположительным (Грам +); другие, окрашенные в цвета от темно-розового до красного, относят к
грамотрицательным (Грам -).
У чистых культур некоторых типов бактерий в поле микроскопа могут присутствовать как грамположи-
тельные, так и грамотрицательные клетки.
П р и м е ч а н и е — Плотные скопления клеток могут давать нетипичную картину окрашивания.
12.4
Использование биохимических наборов для идентификации
Можно использовать имеющиеся биохимические наборы для идентификации изолированных
колоний.
Проверяют пригодность биохимических наборов, как показано в ходе оценочных исследований, опуб
ликованных в международной научной литературе, касающейся предпочтительно микробиологии пище
вых продуктов’1. Такая проверка особенно важна, если изготовитель не имеет данных об адекватности
своих наборов.
Лаборатория должна получить сертификат контроля на каждую партию с указанием испытанных
штаммов.
Изготовительдолжен также определить контрольные штаммы, которые лаборатория может использо
ватьдля проверки сохранности характеристик биохимических наборов.
Наборы должны включать, как минимум, биохимические тесты, описанные всоответствующих стан
дартах. или к ним должны прилагаться другие тесты.
’’ Запросы об информации следует направлять в национальные, региональные или международные
справочные центры, указанные для каждого микроорганизма.
44