ГОСТ ISO 7218—2011
После термостатирования несколько колоний (обычно пять на чашку с агаровой средой) подвергают
идентификации, используя подходящую методикудля подтверждения.
Выбор колоний для подтверждения должен охватывать репрезентативные типы сомнительных
колоний.
11.3 Измерение неопределенности
Оценка неопределенности измерения качественных анализов разрабатывается ISO/TC 34/SC 9.
12 Метод идентификации (подтверждения)
12.1 Общие положения
Для биохимического и серологического подтверждений используют только чистые культуры.
Стандартные методы подтверждения описаны в соответствующих нормативныхдокументах. В каче
стве альтернативы биохимическим методам, приведенным вэтих стандартах, методы подтверждения, ука
занные в данном разделе (биохимические наборы, нуклеиновые пробы), следует использовать в услови
ях, указанных также в данном разделе, если они особо не оговорены в соответствующих стандартах.
12.2 Приготовление чистой культуры
Приготовление чистых культур начинают с выделения одной колонии вагаровой среде. Затем выде
ленную колонию пересевают на неселективную агаровую среду. После инкубации в термостате выделяют
хорошо изолированную колонию для последующих подтверждающих испытаний. При необходимости по
сев колонии повторяют.
Желательно выполнятьидентификацию, используя клетки одной колонии. Если в одной колонии недо
статочно количества клеточного материала, материал вначале рекомендуется посеять вжидкую среду или
на косой агар (косяк), после чего можно использовать субкультуру для выполнения испытаний.
12.3 Окрашивание по Граму (модифицированный метод Хаккера)
12.3.1 Общие положения
Данный способокрашивания бактериальных клеток позволяетописать морфологию бактерий и разде
лить их на две группы по тому, способны они или нет сохранять цвет кристаллического фиолетового (грам-
положительные Грам+) в условиях испытания. Результаты такогоделения, главным образом, вытекают из
различий в структуре клеточных стенок двух групп, что коррелирует с другими основными различиями
между двумя группами.
Удовлетворительной альтернативой окрашивания по Граму является использование 3%-ного раство
ра гидроокиси калия (КОН). Полную петлю выросшей культуры бактерий перемешивают в двух каплях
раствора КОН. Грамотрицательные (Грам-) бактерии станут причиной увеличения вязкости и слизистости
раствора втечение 30 с, так чтосмесь тянется за бактериологической петлей при поднятии петли.
Существует несколько приемов выполнения окрашивания по Граму. но всеони соответствуют после
довательности. приведенной 12.3.2.
12.3.2 Растворы
12.3.2.1 Общие положения
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые растворы.
В таком случае следуют рекомендациям изготовителя.
12.3.2.2 Раствор кристаллического фиолетового
12.3.2.2.1 Состав:
кристаллический фиолетовый — 2,0 г,
этиловый спирт (95 %)— 20 см3:
оксалат аммония (C2HsN20 4)— 0.8 г,
вода — 80 см3.
12.3.2.2.2 Приготовление
Растворяют кристаллический фиолетовый в этиловом спирте, а оксалат аммония — вдистиллирован
ной воде. Смешивают эти два раствора и оставляют смесь на 24 ч до использования.
43