ГОСТ ISO 7218—2011
10.2.4.3.2 Приготовление чашек с агаровой средой
Для приготовления чашек с агаровой средой рекомендуется использовать автоматический дозатор
со стерильной системой дозирования, чтобы получить чашки с одинаковым объемом агаровой среды.
Во все чашки наливают одинаковое количество агара таким образом, чтобы под дозирующей иглой
спиральногодозатора высота слоя агара была одинаковой во всех чашках и чтобы угол контакта оставался
правильным и одинаковым.
Альтернативно можно использовать готовые агаровые чашки, имеющиеся в продаже.
10.2.4.3.3 Процедура нанесения посевного материала и подсчет
Обеззараживают кончик дозирующей иглы и трубку, обмакнув их в раствор гипохлорита натрия
(см. 5.24.4), а затем в стерильную воду через систему, перед тем как втянуть в дозирующую иглу жидкий
образец.
Помещают предварительно разлитую агаровую среду в чашке Петри на поворачивающий столик и
опускают дозирующую иглу. Проба распределяется по среде по мере движения кончика иглы по поверхно
сти агаровой среды. Засеянную чашку убирают, а дозирующую иглу возвращают в исходное положение.
Иглу обеззараживают и загружают для посева в другие чашки.
После термостатирования на поверхность засеянной агаровой среды помещают специальную сетку
для подсчета количества микроорганизмов вчашках, засеянных по спирали. Для определения количества
микроорганизмов используют «правилодвадцати». Подсчет колоний начинают, выбрав клин и начав под
счет от наружного края первого сегмента по направлению к центру, пока не подсчитают 20 колоний. Про
цедуру завершают подсчетом всегменте, содержащемдвадцатую колонию. На противоположной стороне
чашки подсчитывают соответствующий участок и делят число колоний, подсчитанных по обе стороны, на
объем образца, нанесенный на два данных участка. Объемы образца, соответствующие каждой части
счетной сетки, приведены в инструкциях, которые прилагаются к каждому спиральному дозатору.
10.2.5 Термостатирование
Если в соответствующих стандартах нет специальных оговорок, чашки после посева незамедлитель
но переворачивают и быстро помещают втермостат сустановленной соответствующей температурой. Если
происходит интенсивное обезвоживание (например, при 55 °С или в случае интенсивной циркуляции возду
ха). чашки перед термостатированием неплотноукладывают в пластиковые пакеты или используют сход
ную систему равной эффективности.
Во время термостатирования неизбежно происходят незначительные колебания температуры, напри
мер во время зафузки и разфузки термостата, ижелательно, чтобы такие периоды занимали минимальное
время. Продолжительность таких операций рекомендуется отслеживать, чтобы недопустить их заметного
влияния на результат.
П р и м е ч а н и е
— В
определенных случаях, чтобы не спутать частицы исследуемого продукта с
колониями микроорганизмов, полезно будет приготовить дубликаты засеянных чашек, которые хранят при
температуре (3 ± 2) ”С. для последующего сопоставления при подсчете с инкубированными засеянными
чашками. Можно также использовать бинокулярное увеличительное стекло, чтобы отличить частицы продукта и
колонии микроорганизмов.
В определенных обстоятельствах желательно поместить засеянные чашки вхолодильник не более
чем на 24 ч перед термостатированием. Если это используется, лаборатория должна гарантировать, что
подобная практика не влияет на результат подсчета.
Обычно чашки Петри составляют друг на друга, не более шести штук в стопке при аэробной инкуба
ции. Стопки следует ставитьдруг отдруга и от стеноктермостата на расстоянии не менее 25 мм. Однако в
термостатах, оснащенныхсистемой циркуляции воздуха, высота стопок может быть больше, а расстояние
между
ними меньше; однако в этом случав необходимо проверять равномерность распределения темпе
ратуры втермостате.
После термостатирования чашки следует немедленно исследовать. Однако их можно хранить, если
нет иных указаний в соответствующих стандартах, до 48 ч в холодильнике. Хранение в холодильнике в
течение более длительных периодовдопускается только в случаях, если показано, что оно не влияет на
количество искомых микроорганизмов, внешний вид или последующую идентификацию колоний. Охлаж
денные чашки с некоторыми средами, содержащими индикаторные красители, рекомендуется привести
в равновесие с условиями окружающей среды при комнатной температуре перед исследованием,
чтобы обеспечить восстановление правильной окраски.
32