ГОСТ ISO 7218—2011
10.5 Подсчет при использовании жидких сред
10.5.1 Принцип
Пробы для анализа высевают в жидкую среду, предназначенную для поддержки роста конкретного
микроорганизма или группы микроорганизмов и часто— для подавления размножения прочих микроор
ганизмов.
Чтобы определить, происходит ли рост искомых микроорганизмов, можно использовать различные
критерии, например визуальное обследование помутнения, выделение газа, изменение цвета, последую
щее выделение микроорганизмов на селективной агариэованной среде. Состав питательной среды и крите
рии для выявления различий положительного и отрицательного результатов определены всоответствую
щих стандартах.
Используя подобный подход, каждый образец для анализа может быть описан только качественно,
значение, т.е. результатоценивается как положительный или отрицательный. Чтобы установить количество
присутствующих микроорганизмов, необходимо исследовать несколько проб образцов для анализа и ис
пользовать статистические методыдля определения наиболее вероятного числа (НВЧ = MPN).
10.5.2 Посев
10.5.2.1 Общие положения
Если используют селективную питательную среду, добавление образца для анализа не должно умень
шать селективных свойств этой среды (тем самым способствуя росту прочих микроорганизмов). В боль
шинстве стандартов информация о совместимости определенных образцов и жидкой среды описана в
области их применения. Необходимо с осторожностью подходить к таким образцам, как специи, какао,
бульон и т. д.. поскольку они могут содержать подавляющие рост микроорганизмов вещества, в связи с
чем требуют добавления нейтрализующих веществ, применения более высоких коэффициентов разведе
ния. центрифугирования, фильтрования или иммуномагнитной сепарациидля выделения искомых микроор
ганизмов из образца, даже если это специально не оговорено всоответствующих стандартах. Несовмести
мость может также быть вызвана биологическим составом образца: сильно загрязненные от окружающей
среды пробы, ферментированные продукты или продукты, содержащие пробиотики, очевидно, представля
ют большие проблемы микробиологу-аналитику. чем пробы, которые содержат очень незначительное ко
личество микроорганизмов. Для таких проблемных образцов рекомендуется выполнять эксперименты,
ис пользуя контрольные микроорганизмы, чтобы подтвердить, что методдействительно подходитдля
анализа данного образца.
10.5.2.2 Проведение анализа
Если в соответствующих стандартах нет иных указаний, объемы образцов для анализа, менее или
равные 1 см3,обычнодобавляют к объемусред обычной концентрации, в5—10 раз превышающему объем
пробы для анализа. Пробы для анализа объемом 1 и 100 см3обычнодобавляют к равным объемам сред
двойной концентрации.
Для объемов, превышающих 100 см3,допускается использовать более концентрированные среды.
Для особых целей стерильную обезвоженную среду можно растворить в холодном (или предварительно
нагретом до 30 °С) образце, подлежащем анализу.
Если нет иных указаний, время, прошедшее с момента приготовления первого разведения пробы
и момента засева последней пробирки многолуночного планшета или флакона, должно составлять
менее 15 мин.
Новую стерильную пипетку следует использоватьдля каждого разведения.
10.5.3 Выбор способа посева
Сущность метода наиболее вероятного числа (НВЧ) заключается в разбавлении пробы до такой сте
пени, чтобы посевной материал не всегда содержал живые микроорганизмы. По «выходу», т. е. по количе
ству посевного материала, дающему рост в каждом разведении, будет оцениваться начальная концентра
ция бактерий в пробе. Чтобы получитьоценку в широком диапазоне возможных концентраций, микробиоло ги
используют серийные разведения, инкубируя в термостате по несколько пробирок (или чашек и пр.)
каждого разведения. НВЧ (MPN) микроорганизмов, присутствующих на уровне исходной пробы, и точ
ность оценки можно рассчитать с помощью статистических методов на основе числа положительных и
отрицательных пробирок, полученных после инкубации втермостате.
Осуществляют выбор НВЧ из различных существующих конфигураций в соответствии.
- с ожидаемым числом микроорганизмов в анализируемой пробе,
- требованиями регламентов.
38