ГОСТ Р ИСО 21571—2014
Исходя из практических и технических соображений не рекомендуется, чтобы масса пробы для
анализа превышала 2 г.
Любые ограничения, связанные с массой (объемом) пробы для анализа, не позволяющие рассма
тривать ее как представительную, должны быть учтены при интерпретации аналитических результатов и
указаны в протоколе испытаний.
Методы экстракции ДНК. приведенные в приложении А. устанавливают массу пробы для анализа
от 200 до 500 мг. что обычно является приемлемым для продукции с высоким содержанием ДНК (мо
лотое зерно, мука). Однако некоторые продукты содержат очень малое количество ДНК или дегради
ровавшую ДНК. в связи с этим указанная масса пробы не позволит выделить достаточное для анализа
количество ДНК. В таких случаях масса (объем) пробы может быть увеличена.
Выделение ДНК должно выполняться не менее чем из двух параллельных проб одной и той же
продукции.
Хранение стандартных образцов, лабораторных проб и анализируемых пробдолжно соответство
вать требованиям ИСО 24276 и быть организовано таким образом, чтобы анализируемые биохимиче
ские параметры были сохранены (подробнее см. ИСО/МЭК 17025).
5.1.2 Пробы
Все операции по приготовлению лабораторных проб (например, измельчение, гомогенизация,
деление, высушивание) должны выполняться в соответствии с лабораторными правилами, описан
ными в ИСО 24276:2006 (пункт 5.3.2). При выполнении всех необходимых операций должны быть
приняты меры предосторожности для защиты лабораторной пробы от загрязнения или изменения ее
состава.
Лабораторные пробы должны быть достаточно гомогенными перед измельчением или размолом
и перед отбором анализируемой пробы.
В случае жидких проб сосуд с пробой необходимо встряхивать для обеспечения гомогенизации
продукта. В случае негомогенных продуктов типа неочищенных масел необходимо убедиться, что оса
док и все нерастворимые составляющие полностью удалены со стенок сосуда.
В случае твердых проб, которые не могут быть суспендированы без затруднений, лабораторная
проба должна быть размолота для уменьшения размера частиц и/или облегчения экстрагируемости
ДНК. В таких случаях особое внимание необходимо обратить на размер частиц. Проба для анализа,
подвергаемая экстракции, должна содержать минимальное количество частиц. Необходимо, чтобы
оборудование, предназначенное для дробления и измельчения проб, было легко моющимся по всей
рабочей поверхности и обеспечивало требуемое количество и распределение по размерам частиц
(гранулометрический состав) анализируемой пробы.
Если какие-либо компоненты лабораторной пробы были удалены до проведения экстракции ДНК.
то это должно быть указано в протоколе испытаний с описанием проведенных операций.
Для твердых или пастообразных готовых пищевых продуктов с высоким содержанием липидов
достаточно трудно достичь требуемого размера частиц за один этап измельчения. В таких случаях до
пускается перед измельчением применять дополнительные процедуры, такие как удаление липидов
гексаном после промежуточного измельчения, замораживание или сублимационная сушка.
Для улучшения измельчения пастообразных или вязких продуктов в некоторых случаях можно ис
пользовать одну из следующих обработок:
- нагрев до максимальной температуры 40 °С;
- растворение в соответствующей жидкости, например в воде:
- замораживание при температуре минус 20 °С или ниже.
После такой обработки необходимо гомогенизировать всю лабораторную пробу. Затем необхо
димо отобрать две параллельные анализируемые пробы с учетом возможного проведения в дальней
шем процедур разбавления или концентрирования.
Во время проведения процедур размола и измельчения необходимо соблюдать меры, гарантиру
ющие нагрев лабораторной пробы на минимальном уровне и не допускающие ее сильного нагревания,
так как нагрев может отрицательно воздействовать на качество выделяемой ДНК.
По возможности необходимо избегать способов размолаУизмельчения, при которых возникает вы
сокий риск перекрестного загрязнения (например, комбинированное использование жидкого азота и
ступки, а также использование одной и той же ступки для разных образцов). Одним из основных требо
ваний является необходимость изолирования любого методологического этапа, при проведении кото
рого происходит образование пыли, от всех других аналитических этапов и процедур.
3