ГОСТ РИСО 21571—2014
П р и м е ч а н и е — Для вычисления в таблице А.7 LOD принят как 10 копий.
Таблица А.7 суммирует результаты совместного межлабораторного испытания. В четырех из пяти образ
цов были получены значения LOOprac ниже 0.9 % (пример для существующего законодательного порога). Для
образца лецитина 2 LODprac был выше 0.9 % только в одной лаборатории, для образца лецитина 3 — в
двух лабораториях. Для образца лецитина 5 все лаборатории амплифицировали меньше 80 копий гена
лектина, и таким образом не удалось достичь значения LODpnsc0.9 % или менее. Кроме того, были вычислены
коэффици енты вариации воспроизводимости для числа копий лектина, сообщавшиеся для пяти образцов
лецитина. Всего для оценки использовали данные ПЦР в реальном времени 36 экстракций ДНК на один
образец лецитина сои. При расчете коэффициента вариации воспроизводимости Суде не было удалено ни
одного «выброса». Точность данных для образца 5 не могла быть приведена из-за низкого количества
копий лектина, которое было ниже LOO метода. Было отмечено, что данные точности отражают коэффициента
вариации воспроизводимости числа копий, экстрагированных изобразцов лецитина в условиях
воспроизводимости межлабораторных исследований.
Таблица А.7 — Сводка результатов подтверждения правильности данных
Образец
лецитина №
Среднее количество
копий лектина
Коэффициент вариации
воспроизводимости Суд. %
Средний лимит прзхтиче-
с«отообнаружения LODOTC
Количество лабораторий
сЮОр,ж <0.9%
1
17 044
67
0.06
12/12
2
3 630
63
0.28
11/12
3
2 318
57
0.43
10/12
4
8 325
52
0.12
12/12
5
<80
Не обнаруживается
> 10
0/12
А.5.2.4 Принципы и заключения
Материал из вязкого образца гомогенизируют после нагревания и экстрагируют с помощью гексана по
сле добавления гуанидин тиосульфатного буфера. Мешающие сопутствующие вещества отделяют экстракцией
хлороформом, а присутствующую в растворе РНК разрушают РНКазой А. ДНК осаждают изопропанолом в при
сутствии гликогена, затем промывают этиловым спиртом и растворяют в воде. Для очистки ДНК проводят гель-
фипырацию (с использованием перекрестно-сшитого декстранового геля для разделения по размеру).
А.5.2.5 Термины и определения
Для целей этого подпункта применяются условия и определения, предусмотренные в ИСО 21571 (43) и
ИСО 24276.
А.5.2.6 Тип и количество образца
Следует убедиться, что анализируемая проба репрезентативна для исследования лабораторной пробы.
Измерения и операционные этапы, которые следует выполнить, описаны в 5.1. Материал образца должен быть
максимально гомогенным.
А.5.2.7 Оценка отклонения измерений
Отклонения в данных ПЦР в реальном времени для гена лектина, определенные в ходе межлабораторных
испытаний, приведены как коэффициент вариации воспроизводимости. Результаты приведены в таблице А.7.
А.5.2.8 Мешающие факторы
Степень рафинирования лецитина может влиять на способность экстракции ДНК из образцов лецитина из-
за возможной деградации ДНК. сопровождающей этот технологический процесс.
А.5.2.9 Условия окружающей среды
Никакие особые условия не требуются. См. ИСО 24276.
А.5.2.10 Оборудование
Используется обычное лабораторное оборудование.
А.5.2.10.1 Настольная центрифуга для пробирок на 1.5 или 2 см3, обеспечивающая ускорение 12000д.
А.5.2.10.2 Центрифуга для пробирок на 50 см3, обеспечивающая ускорение не менее 4000д.
А.5.2.10.3 Полипропиленовые центрифужные пробирки на 1.5. 2.0 и 50 см3, для использования в центри
фугах на 12000д и 4000д.
А.5.2.10.4 Нагревательный блок со встряхивателемЧ
А.5.2.10.5 Вакуумная сушилка (при необходимости).
А.5.2.10.6 Мультимиксер, например Vortex6’.
Eppendorf Thermomixer— пример подходящего коммерческого продукта. Эта информация приводится для
удобства пользователей настоящего стандарта и не означает обязательное использование только этого оборудо
вания. Может использоваться эквивалентное оборудование, если его применение приводит к тем же результатам.
26