ГОСТ РИСО 21571—2014
гемином и т. д.). Кроме того, такие структурные изменения часто являются специфичными для определенной по
следовательности ДНК и поэтому не распределены по геному случайным образом (см. [1]—{4]).
Пользователям настоящего стандарта необходимо иметь в виду, что некоторые методы (напри
мер. методы на основе диоксида кремния) могут быть запатентованы.
3.2 Экстракция ДНК
Основной принцип выделения присутствующей в пробе ДНК заключается в одновременной или
последующей очистке ДНК от ингибиторов полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Методы выделения и очистки ДНК изложены в приложении А. Выбор метода основывается на
опыте пользователя с учетом области применения и примеров продуктов, которые указаны в каждом
методе.
Альтернативные методы могут применяться при условии, что метод был проверен на соответству
ющем продукте, подлежащем исследованию.
3.3 Количественная оценка содержания ДНК
Количественная оценка экстрагированной ДНК может потребоваться для последующего ПЦР-
анализа.
Такая оценка может выполняться либо физическими (например, измерением поглощения при
специфической длине волны), физико-химическими (например, применением интеркалирующих или
связующих агентов, обладающих флюоресцентными свойствами), ферментативными (например, био-
люминесцентным обнаружением) методами, либо путем количественной ПЦР. Последний метод при
меняется для продуктов сложного состава, проб с низким содержанием ДНК или проб, в которых ДНК
подверглась деградации.
Существует несколько методов, применяемых для определения количества ДНК, присутствую
щей в растворе. Эти методы изложены в приложении В.
Выбор наиболее подходящего метода осуществляется пользователем в зависимости от количе
ства и качества ДНК, подлежащей количественному определению, а также от продукта, из которой
была экстрагирована ДНК.
Альтернативные методы могут применяться при условии, что метод был проверен на соответству
ющем продукте.
4 Общие требования клаборатории
Вследствие воздействия пыли и распыляемых аэрозолей может происходить случайная контами
нация ДНК, поэтому организация рабочих мест в лаборатории основывается на строгом соблюдении:
- последовательности всех установленных методологических этапов, используемых для получе
ния промежуточных и конечных результатов;
- принципа «прямого потока» при обращении с пробами.
Использование последнего принципа гарантирует, что ДНК. подлежащая анализу, и полученная в
результате ПЦР амплифицироваиная ДНК, остаются физически разделенными.
Дополнительные требования к лабораториям приведены в ИСО 24276.
5 Методика
5.1 Приготовление проб для анализа
5.1.1 Общие положения
Специфические параметры анализируемого продукта (например, влажность) и его обработка мо
гут влиять на количество и качество ДНК, выделяемой из анализируемого продукта. В связи с этим
рабочие характеристики применяемого метода экстрагирования ДНК зависят от конкретного анализи
руемого продукта.
Необходимо принять соответствующие меры, чтобы гарантировать, что проба для анализа явля
ется представительной, отобранной из лабораторной пробы.
Проба для анализа должна быть достаточно^го) массы (объема) и содержать достаточное коли
чество молекул ДНК для обеспечения представительности лабораторной пробы.
2