ГОСТ РИСО 21571—2014
А.1.3.5 Реактивы
А.1.3.5.1 Изопропанол [СН3СН{ОН)СНз].
А.1.3.5.2 Этиловый спирт. С2Н5ОН. 96 %-ный
Следует хранить и использовать при температуре минус 20 "С.
А.1.3.5.3 Ледяная уксусная кислота. СН3СООН.
А.1.3.5.4 Хлорид натрия, NaCI.
А.1.3.5.5 Цитрат натрия. C6H5Na30 7.
А.1.3.5.6 Соляная кислота. HCI. 37 %-ная.
А.1.3.5.7 Гидроксид натрия. NaOH.
А.1.3.5.8 Изоамиловый спирт 1(СН3)2СНСН2СН2(ОН)1.
А.1.3.5.9 Фенол. С6Н5ОН.
А.1.3.5.10 Хлороформ. СНС13.
А.1.3.5.11 Трис(оксиметил) аминометан (Трис). С4Н,,М03.
А.1.3.5.12 Этилендиаминтетрауксусной кислоты двунатриевая соль (№а2ЭДТА), C,0Hu N2OeNa2.
А.1.3.5.13 Додецилсульфаг натрия (SOS). C12H250 4SNa.
А.1.3.5.14 Лизоцим, 50000 ед.-’мг белка (1 ед. будет давать ДД450 = 0.001 в минуту при 6,24 ед pH и темпера
туре 25 ”С. используя суспензию Micrococcus lysodeikticus в качестве субстрата, в 2.6 см3 реакционной смеси при
оптической длине пути 1 см).
А.1.3.5.15 Сахароза. С12Н220 1г
А.1.3.5.16 Протеиназа-К. приблизительно 20 ед./мг лиофилизата.
А.1.3.5.17 Ацетат натрия. C2H30 2Na.
А.1.3.5.18 Раствор цитрата натрия. CeH5Na30 7.400 г/дм3.
А.1.3.5.19 Раствор гидроксида натрия. NaOH. 0.4 моль/дм3
Растворяют в стерильной воде. Автоклавирование не допускается. Перед использованием готовят свежий
раствор.
А.1.3.5.20 Раствор хлорида натрия/цитрата натрия (SSC 5*. концентрированный 5-кратный основной рас
твор). (NaCI). 0.75 моль/дм3. (C6H5Na30 7), 0.075 моль/дм3.
Целесообразно готовить концентрированный основной раствор SSC 20* (например. 20-кратный основ
ной раствор, так как растворы с высокой концентрацией солей обычно более устойчивы). Разбавляют перед
использованием.
А.1.3.5.21 Уравновешенный фенол
Используется фенол со значением 8.0 ед. pH и уравновешенный буфером Трис/HCI (> 7.8 ед. pH) или. напри
мер. приготовленный в соответствии с [5] или рекомендациями изготовителя.
А.1.3.5.22 Смесь хлороформ — изоамиловый спирт
Смешивают 24 объемные части хлороформа (А. 1.3.5.10) и одну объемную часть изоамилового спирта
(А. 1.3.5.8).
А.1.3.5.23 Смесь фенол — хлороформ — изоамиловый спирт
Смешивают 25 обьемных частей насыщенного фенола (А.1.3.5.21) с 24 объемными частями хлороформа
(А 1.3.5.10) и одной объемной частью изоамилового спирта (А. 1.3.5.8).
А.1.3.5.24 Раствор мутанолизика в стерильной воде, содержащий 500 или 5000 ед./см3мутанолизина
Автоклавирование не допускается. Следует хранить при температуре минус 20 "С. избегать многократного
замораживания и оттаивания.
А.1.3.5.25 Раствор лизоцима в стерильной воде, содержащий 10 мг/см3лизоцима
Автоклавирование не допускается. Следует хранить при температуре минус 20 "С. избегать многократного
замораживания и оттаивания
А.1.3.5.26 Раствор сахарозы. С ^Н ^О ,,. 400 г/дм3.
А.1.3.5.27 Буферный раствор А. (Трис). 0.020 моль’дм3. (Na23flTA). 0.020 моль/дм3. (NaCI). 0,100 моль/дм3
Доводят значение до 8.0 ед. pH. используя НО или NaOH.
А.1.3.5.28 Буфер для экстрагирования/лизиса. содержащий 1 обьемную часть буферного раствора А
(А 1.3.5.27) и одну обьемную часть раствора сахарозы (А.1.3.5.26).
А.1.3.5.29 Раствор SDS. (SDS). 250 г/дм3.
А.1.3.5.30 Раствор протеиназы-К в стерильной воде. 20 мг/см3
Автоклавирование не допускается. Следует хранить при температуре минус 20 "С. избегать многократного
замораживания и опаивания.
А.1.3.5.31 Раствор этилового спирта. (C ^jO H ), 70 %-ный
Следует хранить и использовать при температуре минус 20 "С.
А.1.3.5.32 Раствор ацетата натрия. (C2H30 2Na). 3 моль/дм3
Доводят значение pH до 5.2 ед. pH ледяной уксусной кислотой.
А.1.3.5.33 Буфер ТЕ. (Трис). 0.010 моль/дм3, (Наа.ЭДТА), 0.001 моль/дм3
Доводят значение pH до 8.0 ед. pH. используя HCI или NaOH.
А.1.3.6 Оборудование
Применяется обычное лабораторное оборудование, в частности следующее.
12