ГОСТ РИСО 21571—2014
Переносят надосадочную жидкость в новую пробирку. Добавляют один объем хлороформа (А.5.1.5.3) и пере
мешивают с помощью смесителя (А.5.1.6.3). Центрифугоруют в течение 15 мин при ускорении 8000д. Переносят
надосадочную жидкость в новую пробирку. Добавляют 0.6 обьема изопропанопа (А5.1.5.8). перемешивают путем
переворачивания. Пробирки оставляют на льду на 50 мин.
Центрифугируют в течение 20 мин при ускорении 8000д. Осадок после центрифугирования промывают не
менее чем 2 см3раствора этилового спирта (А.5.1.5.16) и центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 8QOOg.
Эта стадия является важной для удаления любых солей, которые могут оказывать влияние на последующий ана лиз
(например. ПЦР). Надосадочную жидкость отбрасывают. Осадок после центрифугирования высушивают и по
вторно растворяют в 100 мм3 воды или соответствующего буфера, например буфера ТЕ (А.5.1.5.21). Этот раствор
является основным раствором ДНК. Если потребуется дополнительная стадия очистки, то ее необходимо выпол
нять на основном растворе ДНК.
А.5.1.8 Перечень примеров
Метод был успешно применен для экстрагирования ДНК11из следующих продуктов: подкисленная соя. кон
сервированная кукуруза, кормовой жмых, плиточный шоколад1),десертный крем11, хлопья из цельной сои. початки
кукурузы, кукурузная мука, зародыши кукурузы1), кукурузный глютеновый корм1), модифицированный кукурузный
крахмал1), белки из кукурузы1), семенаг’зерна кукурузы, кукурузная крупка, нативный кукурузный крахмал1), семена’
зерна ралса. соусы1), мука из сои. соевый творог, соевый лецитин (необработанный коричневый1’ и рафинирован
ный желтый1), белок из сои. семена/зерна сои. кукурузные чипсы1’.
Данный метод непригоден для анализа проб масел, мальтодекстрина. D-глюкозы, мальтита. маннита или
ксилита массой 1 г.
А.5.2 Гуанидин хлороформный метод: Протокол для соевого лецитина
А.5.2.1 Назначение, обоснованность, научное основание
Соевый лецитин часто используется во многих продуктах питания в качестве эмульгатора. Лецитин может
производиться из сои как генетически модифицированной (ГМ), так и генетически неизмененной. Описанный ме тод
можно использовать для экстракции ДНК из исследуемого образца, чтобы в последующем провести ПЦР для
обнаружения генетически модифицированных последовательностейДНК из ГМ-сои. Метод взят из [44]. подобная
методика была апробирована в ходе межлабораторного исследования в Швейцарии. В данном исследовании ко
личество выделенной ДНК определялось спектрометрическим способом [35]. Дополнительную экспертизу прово
дил Химический и Ветеринарный институт Фрайбурга (Германия) совместно с 12 лабораториями, в ходе которой
количество выделенной и в последующем амплифицированной ДНК сои было определено посредством количе
ственного ПЦР-анализа в реальном времени. Результаты опубликованы в источнике [45].
А. 5.2.2 Область применения
Настоящий метод описывает процедуру экстракции ДНК из соевого лецитина в сыром растительном мас
ле. полученном способом холодного прессования. Если содержание ДНК в исследуемом материале низкое, для
определения количества ДНК. выделенной из анализируемой пробы, и для вычисления практического предела
обнаружения, доступного при использовании ПЦР-анализа. используется ПЦР в реальном времени.
А.5.2.3 Статус валидации и критерии исполнения
А.5.2.3.1 Статус валидации
Метод, описанный в этом подпункте, был апробирован в ходе межлабораторного исследования по опре
делению количества выделяемой и амплифицируемой ДНК сои с помощью количественной ПЦР в реальном
времени. Совместное исследование было выполнено в соответствии с протоколом IUPAC [46].
А.5.2.3.2 Надежность метода
Методика обычно использовалась для тестирования ГМО в испытательных и частных лабораториях в Гер
мании и Швейцарии, на протяжении более 10 лет и ни о каких проблемах не сообщалось. Хотя специфические
данные надежности (например, по модификации параметров метода) и недоступны, опыт различных лаборато
рий показал, что небольшая вариация условий используемой методики не сказывается на ее эффективности.
А.5.2.3.3 Внутрилабораторные испытания
Материалы, использовавшиеся в совместном межлабораторном исследовании, для оценки относительной
точности метода были проверены в лаборатории, которая разработала данный метод. Для оценки точности были
подготовлены пять экстракций ДИК из каждого из пяти лецитинов сои. проведены измерения с помощью ПЦР в
реальном времени при воспроизводимых условиях с использованием метода, специфичного для гена лектина
сои согласно ИСО 21570:2005. С.2 [41]. Результаты приведены е таблице А.6.
’) Повторяемость может зависеть от партии продукта и’или технологии его получения. В некоторых случаях
ДНК не может быть обнаружена или она подверглась расщеплению таким образом, что результаты ПЦР оказы
ваются ниже предела обнаружения метода независимо от используемых праймеров и/или протоколов ПЦР Это
может быть причиной низкой воспроизводимости результатов между лабораториями.
24