ГОСТ РИСО 21571—2014
В.2.8.5 Окрашивание
После завершения электрофореза выдерживают гель в течение 15—50 мин в растворе бромистого этидия
(В.2.6.17) при комнатной температуре, если возможно, в темноте (и/или в сосуде из нержавеющей стали с крыш
кой). осторожно встряхивая.
При необходимости уменьшения фонового окрашивания необходимо поместить гель в воду на 10—30 мин.
Как вариант можнодобавлять Е1Вгк гелю перед его разливом. В этом случае добавляют EtBr к гелю до конеч
ной массовой концентрации 0.01 мг на миллиметр геля, охлажденного до температуры 60 "С.
Если гель разливается вместе с бромистым этидием, загружают неизвестный образец и стандарт количества
ДНК (В.2.6.4) в отдельные лунки, образованные той же гребенкой на том же геле. Иначе количество бромистого
этидия будет различным для образца и стандарта, что приведет к ошибочным результатам количественного ана
лиза. Чтобы свести к минимуму проблемы, связанные с движением EtBr в геле, некоторое количество EtBr может
быть также добавлено к буферу для электрофореза (в ячейку). После электрофореза в теле обычно не требуется
проведения стадии удаления окрашивания.
В данном случае после окончания электрофореза удаление окрашивания обычно не проводится.
В.2.8.6 Регистрация геля
Переносят гель на поверхность трансоблучателя, включают УФ-свет и регистрируют флуоресценцию ДНК с
помощью фото- или видеозаписи.
В.2.9 Оценка/ингерпретация результатов
Содержание ДНК в образце оценивают, сравнивая неизвестные образцы с образцами стандартного количе
ства ДНК. которые подвергаются электрофорезу параллельно. Эта оценка гложет выполняться визуально или с по
мощью программного обеспечения количественного анализа, пригодного для расчета адекватной калибровочной
кривой.
В.З Метод ПЦР в реальном времени для количественного анализа выделенной ДНК
При выделении ДНК из продуктов с низким содержанием ДНК количественный анализ не всегда возможно
провести обычными физическими методами (например, методами, описанными в настоящем приложении) по при
чине их недостаточной чувствительности. Если необходим такой количественный анализ, то можно использовать
метод ПЦР в реальном времени. Этот метод также дает информацию относительно способности применения вы
деленных молекул ДНК для ПЦР. которую нельзя получить путем выполнения физических измерений концентра
ций ДНК. Более подробно метод описан в ИСО 21570.
54