ГОСТ Р ИСО 21571—2014
А.5.2.10.7 Термоциклер ПЦР в реальном времени, снабженный источником энергии, необходимым для воз
буждения флуоресцентных молекул, а также оптической системой обнаружения, пригодной для обнаружения
флюоресценных сигналов, генерируемых в ходе ПЦР
А.5.2.10.8 Реакционные пробирки с крышками или колпачками, которые могут выдерживать без поврежде
ния неоднократное нагревание до 100 ”С и охлаждение до 4 "С. а также не влияющие на сигнал флюоресценции,
генерируемый во время амплификации.
А.5.2.10.9 УФ-спектрофотометр или флюориметр. для определения концентрации ДНК.
А.5.2.11 Реактивы и материалы
Характеристики качества используемых реактивов см. в ИСО 24276.
А.5.2.11.1 Гуанидин тиоцианат.
А.5.2.11.2 Трис(оксимегил) аминометан (Трис) или Трис<оксиметил) аминометангидрохлорид (Трис-HCI).
А.5.2.11.3 Этипендиаминтетрауксусной кислоты двунатриевая соль (№2ЭДТА).
А.5.2.11.4 Панкреатическая рибонуклеаза А.
А.5.2.11.5 Гликоген.
А.5.2.11.6 Грет-октилфениловый эфир полиэтиленгликоля [4-{1,1.3.3-тетраметилбутил)фенилполиэтилен-
гликоль]. Triton Х-1001’.
А.5.2.11.7 н-Гексан.
А.5.2.11.8 Хлороформ.
А.5.2.11.9 Хлорид натрия.
А.5.2.11.10 Натрия гидроксид.
А.5.2.11.11 Соляная кислота. НО. 37 %-ная.
А.5.2.11.12 Раствор гидроксида натрия (NaOH) = 0,1 моль/дм3. 10 г гидроксида натрия вносят в мерную
колбу на 250 см3, заполняют колбу водой до калибровочной метки.
А.5.2.11.13 Иэопропанол (2-пропанол).
А.5.2.11.14 Раствор этилового спирта, С2Н5ОН, 70 %-ный. Смешивают 70 см3 этилового спирта с 30 см3
воды.
А.5.2.11.15 Трис-HCI буфер. 6.4 ед. pH. (Трис-HCI) = 0,1 моль/дм3. Растворяют 1,57 г Трис-HCI в приблизи
тельно 70 см3 воды,доводят pH до 6.4 ед. pH соляной кислотой, переливают в мерную колбу на 100 см3 и доводят до
обьема 100 см3водой.
А.5.2.11.16 Буфер Трис-HCI + NaCI. 7.5 ед. pH, (Трис-HCI) = 10 ммоль/дм3, (NaCI) =15 ммоль-’дм3. Раство
ряют 0.166 г Трис-HCI и 88 мг хлорида натрия приблизительно в 70 см3 воды, доводят pH до 7.5 ед. pH используя
соляную кислоту, переливают в мерную колбу на 100 см3и доводят до обьема 100 см3 водой.
А.5.2.11.17 Раствор ЭДТА. 8.0 ед. pH. молярной концентрации 0.5 моль/дм3. Растворяют 18.6 г двунатрие
вой соли ЭДТА в приблизительно 70 см3 воды, доводят pH до 8.0 ед. pH используя гидроксид натрия, переливают
в мерную колбу на 100 см3 и доводят до обьема 100 см3водой.
А.5.2.11.18 Буферный раствор ТЕ. (Трис) = 0.010 моль/дм3и (Ыа2ЭДТА) = 0,001 моль/дм3.
А.5.2.11.19 Гуанидин тиоционатный буфер. (Трис-HCI) = 4.6 моль/дм3, (Na23flTA-2H20) = 0.02 моль/дм3,
(Тритон X-100)= 11,8 г/дм3. Смешивают 2.6 г ТритонаХ-100 (5.2.11.6) и 120 г гуанидин тиоционата (5.2.11.1) и рас
творяют в 100 см3 Трис-HCI буфере (5.2.11.15). добавляют 8.8 см3 раствора ЭДТА (А.5.2.11.17) и 13.2 см3 воды.
Конечный объем буфера — приблизительно 220 см3 при -7.2 ед. pH. Раствор может храниться при комнатной
температуре в течение по крайней мере 12 мес.
А.5.2.11.20 Раствор рибонукпеазы-А. (РНКаза А) = 10 мг/см3. в соответствии с инструкцией изготовителя
или [3J. Растворяют 10 мг рибонукпеазы-А (5.2.11.4) в 1.0 см3 буфере Трис HCI + NaCI (5.2.11.16). Нагревают
раствор в течении 15 мин при 95 ’С. медленно охлаждают при комнатной температуре и затем разделяют на
аликвоты по 50 мм3. Следует хранить раствор в замороженном виде, избегая многократного замораживания и
оттаивания.
А.5.2.11.21 Раствор гликогена, (гликоген) = 20 мг/см3. Навеску 200 мг гликогена в 15 см3 центрифужной
пробирке растворяют в 10 см3 деионизированной воды. Аликвоты раствора можно хранить при 5 ’С до 24 мес.
А.5.2.11.22 Буфер для элюирования, (0.2 ТЕ), (Трис-HCI) = 2 моль/дм3, (ЭДТА) = 0.2 моль/дм3. 8.0 ед. pH.
Растворяют 158 мг Трис-HCI и 37 мг двунатриевой соли ЭДТА приблизительно в 400 см3 воды; Доводят pH до 8.0
ед. pH. Переливают раствор в мерную колбу на 500 см3 и доводят до обьема водой. Раствор автоклавируют.
Аликвоты раствора можно хранить при комнатной температуре в течение 12 мес.
А.5.2.11.23 Колонка MicroSpin S-300 HR для дополнительной очистки ДНК (Amersham Pharmacia Biotech)2’
А.5.2.11.24 Quant-iT PicoGreen dsDNA Quantitation Kit для флюориметрической оценки ДНК (Invitrogen)2’
1>Пример подходящего реактива, имеющегося в продаже. Эта информация приводится для удобства поль
зователей настоящего стандарта и не означает обязательность его применения. Могут использоваться эквивалент
ные реактивы, если их применение приводит к тем же результатам.
2> Колонки MicroSpin S-300 HR и набор Quant-iT PicoGreen dsDNA Quantitation Kit являются примерами под
ходящего коммерческого продукта. Эта информация приводится для удобства пользователей настоящего стандар та
и не означает обязательное использование только этих приборов и реагентов. Могут использоваться эквива
лентные приборы и реагенты, если их применение приводит к тем же результатам.
27