ГОСТ Р ИСО 10993-10—2009
Последняя проба а таблице С.1. местная проба на лимфоузле мыши (LLNA), заслуживает особого внима
ния. Местная проба на лимфоузле мыши (LLNА) была принята Организацией Экономического Сотрудничества и
Развития (OECD) как самостоятельная альтернатива проводящимся исследованиям на морских свинках и как
метод улучшения обращения с животными [83J.
Научной базой для исследования является измерение введенного ЗН-метил-тимидина в лимфоциты в дре
нируемых лимфоузлах мыши под местным воздействием испытуемого образца как показатель сенсибилизации.
Это исследование не включает провокационную фазу. Конечной интересующей точкой является индекс стимуля
ции. означающий соотношение введенного тимидина в лимфоузлы животных, получивших дозу воздействия, с
введенным в лимфоузлы контрольной группы. Исследование является положительным, когда индекс стимуляции
превышает 3 (S! > 3). Внутри- и межлабораторная оценки LLNA показали воспроизводимое соотношение доза
— ответ внутри и между лабораториями (60). (76). (78). (72). (59). (65). (82). Тем не менее, сообщалось о труд ностях в
различии между раздражающими и аллергенными веществами при использовании LLNA (72). (62). (79). Таким
образом. LLNA может производить ложноположительные результаты с раздражителями и может переоце нить
аллергенность веществ, имеющих и раздражающие, и аллергенные свойства (59). Тем не менее, у LLNA есть
преимущества по сравнению с пробами на морских свинках по причине более короткой продолжительности иссле
дования. более объективной конечной точки, меньшего объема требуемого испытуемого вещества, а также это
исследование не включает инъекции полного адъюванта Фрейнда. Возможны усовершенствования методики
исследования путем использования анализа маркеров активации клеток и цитометрии потока (68). (69). Не уста
новлено. могут ли они быть внедрены на практике в стандартные протоколы LLNA для обычной токсикологии. С
другой стороны. LLNA ограничивает выбор тестовых растворителей; в большинстве исследований использова
лась смесь ацетона и оливкового масла. Недавнее исследование демонстрирует вариабельность результатов с
использованием разных растворителей (77). Кроме того, при использовании LLNA невозможно изучать провока
ционную фазу или конфигурации перекрестной реактивности, так как животных умерщвляют после индукции до
забора лимфоузлов.
Проба подколенного лимфоузла (PLNA). использующая подкожное введение в подушечку стопы (63). (66).
(81). является альтернативой пробе на лимфоузле. В данной пробе, кроме прямого измерения активации лимфо
узла. возможно использование антигенов-репортеров для дальнейшего прояснения иммуномодуляции, вызван
ной исследуемым химикатом (58).
Процесс оценки риска не должен полагаться на единственную модель или подход; его проведение должно
быть продуманодля предоставления максимальной гарантии безопасности потребителю. Как правило, это требу
ет исследований на животных моделях и человеческих экспериментальных моделях. Требуется определенная
гибкость при выборе моделей и методов при наличии соответствующей документации и/или обоснования выбора.
Отрицательный ответ, полученный на морских свинках, при надлежащем проведении может быть опреде
ляющим, если исследуемая концентрация имеет достаточный фактор безопасности при условиях использования.
Тем не менее, необходимо избегать классификации исследуемых материалов исключительно на основании веро
ятности и/или тяжести, без должного учета использования этого продукта а будущем.
Риск, т.е. вероятность и тяжесть аллергической реакции на продукт, определяется, в основном, следующи
ми четырьмя факторами: сенсибилизирующий потенциал химического аллергена, его число в продукте, биодос
тупность и условия воздействия. Относительный сенсибилизирующий потенциал химических веществ может
быть определен минимальной индукционной концентрацией, необходимой для стимуляции данного уровня сен
сибилизации; чем меньше эта концентрация, тем выше потенциал аллергена (80), (40). Было
продемонстрирова но. что значительное число случаев аллергического контактного дерматита
обнаруживалось у потребителей, когда остаточный уровень аллергена в продукте превышал его минимальную
индукционную концентрацию, полу ченную путем GPMT (51).
С другой стороны, прогнозирующее исследование смесей и продуктов гораздо менее обоснованно и может
проводиться после исследования ингредиентов продукта. Соответственно, план исследования и интерпретация
результатов могут быть неопределенными, несколько примеров подтверждают и отражают эту возможность. В
исследованиях на животных с экстрактами ацетона из свитера, вызвавшего контактный дерматит у людей, были
выявлены аллергены (хлорофенилгидразоны фосгена) (48). В другом случае, в результате исследования на
животных с экстрактами ацетона/хлороформа из резиновых сапог, вызвавших контактный дерматит у человека,
были выявлены каузативные аллергены меркаптобензотиазол и дибензотиазилдисульфид (47). Была ясно проде
монстрирована необходимость использования надлежащего органического растворителя. Экстракты, подготов
ленные с органическим растворителем, вызвали гиперчувствительность на морских свинках, в то время как
экстракты с солевым раствором не вызвали такой реакции.
Японское руководство основных биологических исследований медицинских материалов и изделий (1995)
принимает процедуру приготовления пробы с органическим растворителем, с последующим выпариванием до
получения осадка, а также процедуру оценки риска путем сравнения процента выхода осадка из материала с
минимальным процентным раствором осадка (смесью) для индукции гиперчувствительности замедленного типа на
животных.
In vitro методы для исследования кожной сенсибилизации на данный момент не доступны для стандартного
использования (13).
33