ГОСТ Р ИСО 10993-10—2009
С.2 Дополнительная информация по исследованиям сенсибилизации на выявление
гиперчувствительности замедленного типа
Сенсибилизация у человека наступает после однократного или многократного накожного воздействия, ини
циируется и запускается компонентами иммунной системы. Особенно важно, чтобы гаптен (химикат) явпялся
существенным по отношению к коже и обладал проникающей способностью. Затем он вступает в реакцию с бел
ками кожи для формирования иммуногенных комплексов. Клетки Лангерганса на эпидермальной/дермальной гра
нице вырабатывают антиген на специфические лимфоциты, которые затем активируются для инициации
иммунных ответов. Небольшой процент этих лимфоцитов является клетками долгосрочной памяти, которые слу
жат основными активаторами в провокационной фазе. Таким образом, последующие повторные воздействия
могут привести к негативным реакциям, которые сопровождаются выбросом лимфокинов активированными лим
фоцитами и другими воспалительными клетками, привлеченными в зону раны.
В 1895 Jadassohn, используя метод аппликаций, обнаружил у пациента клинически контактную аллергию на
ртуть Этот новаторский подход предоставил научную базу для последующих исследований, направленных на
диагноз и прогноз контактной аллергии у человека и животных. Развитие перспективных/прогнозирующих
иссле дований для оценки сенсибилизирующего потенциала химикатов последовало за новаторской
работой Landsteiner и Chase (49). которые твердо обосновали использование морских свинок для изучения
гиперчувстви тельности замедленного типа.
Magnusson и Kligman (50) опробовали множество вариантов исследований на морских свинках и предложи
ли процедуру максимизации на морских свинках (GPMT), основанную на внутрикожных инъекциях (с полным адъ
ювантом Фрейнда (FCA) или без него) и последующих местных аппликациях исследуемого материала на тот же
участок. Предложенная методика требует предварительной обработки испытуемого участка, если исследуемый
материал не является раздражителем. Как правило она достоверно обнаруживает слабые сенсибилизаторы, так
как понятие «слабый» включает нулевую вероятность положительных реакций. Этот чувствительный метод
широко используется. Применение полного адъюванта Фрейнда повышает чувствительность метода исследова
ния и. в некоторых случаях, может переоценить сенсибилизирующий потенциал испытуемого соединения.
В 1965 Buehler (41) предложил использование закрытых аппликаций для обеспечения окклюзии как метод
для оптимизации воздействия и приближения к условиям процедур, используемых на человеке (Human Repeal
Insult Patch Test HRIPT). Высказывалось предположение, что методика окклюзивной аппликации является
чувствительной и точно прогнозирует средние и сильные сенсибилизаторы, таким образом, предотвращая веро
ятность негативных реакций у человеческих моделей при повторной накожной пробе (Human Repeat Insult Patch
Test: HRIPT). Представленные данные показали преимущества окклюзии по сравнению с внутрикожными инъек
циями и местным применением открытого типа. Стимуляция иммунной системы адъювантами не использовалась.
Данный метод признан достаточно чувствительной процедурой для определения самых слабых сенсибилизато
ров и доказан как достаточно гибкий для использования в процедуре оценки риска. Тем не менее, исследование
закрытой аппликацией (исследование бюлера) менее чувствительно по сравнению с GPMT (46).
Эти два исследования, метод закрытой аппликации и максимизации, наиболее часто использовались для
оценки безопасности в Соединенных Штатах Америки и в Европе. Они также являются предпочтительными мето
дами исследований в действующих Руководствах по исследованиям OECD и ЕС. Результаты сенсибилизирую
щих проб на морских свинках зависят от многих факторов, связанных с животными и с техническими аспектами, что
объясняет различия в результатах исследований разных лабораторий, например, линия животных, их пол.
возраст, окружающие условия исследования, исследуемый участок на животном, метод удаления шерсти (стриж-
ка/бритье) или химическая депиляция, тип конфигурации аппликации, число исследуемого материала, качество
окклюзии, время воздействия и считывание тканевого ответа. Были использованы и изучены многочисленные
другие исследования, и у каждого из них есть свои сторонники. В настоящий момент существует несколько мето
дик. признанных приемлемыми в нормативных цепях, при условии, что методика отражена документально надле
жащим образом и обоснована исследователем. Во всех случаях процедуры следует проводить а соответствии с
первоисточником. Список других исследований приведен а таблице С.1.
Недавняя монография ЕСЕТОС приводит новейшую информацию по исследованию накожной сенсибили
зации (44).
Т а б л и ц а С.1 — Альтернативные методы исследования сенсибилизации
замедленного типа
1 Метод с использованием полного адъюванта Фрейнда
2 Метод с использованием разделенного адъюванта
3 Метод открытых эпикутанных аппликаций
4 Оптимальный метод Мауера
5 Тест на подушечках стопы морских свинок
6 Кумулятивный метод с увеличением степени контакта
7 Скарификационный метод (с адъювантом и аппликациями)
8 Метод исследования на ушах мыши
9 Местная проба на лимфоузле мыши
32