ГОСТ Р ИСО 10993-10—2009
8.6.5 Экспериментальные животные и их содержание
Используют молодых здоровых половозрелых кроликов-альбиносов любого пола, одной линии, массой не
менее 2 кг. Если используют другие виды, их выбор должен быть обоснован.
Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с ИСО 10993-2.
Для предварительной оценки исследуемого материала в опытную и контрольную группы берут по три особи.
При неудовлетворительных или сомнительных результатах, полученных при предварительной оценке, про
водят дополнительные исследования.
Животных перед экспериментом и перед каждым воздействием обследуют для выявления возможных
повреждений прямой кишки: опухолей, раздражения, связанного с инфекционными заболеваниями, и т. д.
8.6.6 Процедура исследований
Короткий (6 см) мягкий катетер или канюлю с тупым концом присоединяют к шприцу объемом 1мл и более и
заполняют шприц с катетером таким образом, чтобы объем исследуемого материала не превышал 1 мл. Для каж
дого животного используют индивидуальный шприц с катетером.
Фиксируют животное с помощью удерживающего приспособления, которое обеспечивает свободный дос
туп к промежности, или при помощи лаборанта, осторожно удерживающего животное и фиксирующего его за
задние конечности таким образом, чтобы открыть промежность.
Катетер перед введением смачивают контрольным раствором или подходящей смазкой для облегчения
ввода в кишку.
Захватывают и поднимают хвост животного, открывая промежность. Мягко вводят катетер глубоко в прямую
кишку и впрыскивают 1 мл жидкости из шприца, затем катетер вынимают.
Поскольку объем прямой кишки у животных неодинаков, исследуемый материал может частично выйти из
нее во время или сразу после введения. Аккуратно удаляют остатки материала мягкой тканью.
Повторяют вышеописанную процедуру через 24 ч ежедневно в течение 5 сут.
В длительном эксперименте число введений, их продолжительность и интервалы между ними зависят от
особенностей применения изделия в медицинской практике.
В.6.7 Обследование животных
Через 24 ч после первой аппликации и непосредственно перед следующей отмечают и регистрируют изме
нения внешнего вида промежности, появление выделений, эритемы, раздражения. Животных, у которых обнару
жены выраженные изменения, выделения или опухоли, не позволяющие повторить процедуру, подвергают
эвтаназии, применяя гуманные методы, и исследуют ткани в соответствии с В.6.8.1.
Через 24 ч после последнего введения исследуемого материала животных подвергают эвтаназии с приме
нением гуманных методов. Отсекают участок прямой кишки идистальную часть толстой кишки, разрезают вдоль и
обследуют, отмечая наличие раздражения, повреждений эпителиального слоя или некроза тканей. Прямую кишку и
дистальную часть толстой кишки помещают в соответствующий фиксатор для дальнейших гистологических
исследований.
В.6.8 Оценка результатов
В.6.8.1 Макроскопическое исследование
Через 24 ч после последнего введения исследуемого материала животных подвергают эвтаназии с приме
нением гуманных методов.
Отсекают участок прямой кишки и дистальную часть толстой кишки, разрезают вдоль и обследуют, отмечая
наличие раздражения, повреждений эпителиального слоя или некроза тканей.
Прямую кишку и дистальную часть толстой кишки помещают в соответствующий фиксатор для дальнейших
гистологических исследований.
Сравнивают ректальные ткани в опытных и контрольных группах.
Регистрируют и описывают макроскопические изменения ректальных тканей каждого животного, отмечая
различия между животными опытной и контрольной групп.
П р и м е ч а н и е — Эти наблюдения могут быть полезны при гистопогичвских исследованиях.
В.6.8.2 Гистологические исследования
Раздражающее действие на ректальные ткани проводят патоморфологи. Определяют состояние тканей в
соответствии с системой оценки, представленной в таблице В.4.
Баллы, полученные при микроскопическом исследовании всех животных опытной группы, суммируют и
делят на число наблюдений, чтобы определить средний балл в группе. Максимальное значение может достигать 16.
Те же вычисления повторяют для контрольной группы.
Общее число баллов большее девяти, полученное при микроскопическом исследовании у контрольных
животных, свидетельствует о наличии травмы. Повторное исследование проводят, если другие исследования
или контрольные животные дают такие же высокие баллы.
Разность средних баллов, полученных для опытных и контрольных групп, дает индекс раздражения (см.
таблицу В.5).
При оценке результатов многократного воздействия таблицу В.4 модифицируют, чтобы учесть показатели
реакции тканей, связанные с хроническим раздражением.
28